MRSA SCCmec分型及同患者多部位分离金黄色葡萄球菌的PFGE分析

摘要

金黄色葡萄球菌(金葡菌)是引起人类感染的常见病原菌,常可引起皮肤软组织感染、食物中毒、烫伤样皮肤综合征、中毒休克综合征、人工装置相关性感染、尿路感染、关节炎等,也可导致病情严重、危及生命的血流感染、心内膜炎、心包炎、肺炎等。从上世纪后半叶开始,金葡菌尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染严重危害了人类的身体健康。MRSA的出现及传播使感染的治疗更加困难和棘手。快速、准确地检测出MRSA,掌握流行规律对于控制MRSA所致的院内感染,指导临床医师合理应用抗生素具有重要意义。
　　 一、MRSA耐药性分析
　　 目的:了解本市某三级甲等医院2005年9月～2008年9月MRSA临床分离株的耐药情况。
　　 方法:1、收集天津市某三级甲等医院门诊及住院患者的血、痰、胸腹腔引流液、脓液及眼、耳、鼻等部位分泌物。细菌鉴定采用VITEK全自动系统鉴定法及金黄色葡萄球菌乳胶凝集法,MRSA筛选采用mecA基因扩增法,其中甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)75株；MRSA79株。2、采用微量肉汤稀释法及K-B纸片扩散法测试MRSA对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、环丙沙星、莫西沙星、头孢唑林、氯霉素、林可霉素、庆大霉素、头孢曲松、红霉素、利福平、四环素、万古霉素、替考拉宁、复方磺胺甲噁唑、利奈唑胺、替加环素共18种抗生素药物的敏感性。3、诱导克林霉素耐药的检测采用克林霉素-红霉素双纸片诱导试验(D试验)。
　　 结果：79株MRSA临床耐药株对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢曲松、环丙沙星完全耐药,对氯霉素、复方磺胺甲噁唑耐药率相对较低,分别为3.80％、10.13％,对糖肽类抗生素万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺、替加环素均敏感。7株红霉素耐药、林可霉素敏感或中介的MRSAD试验均阳性。
　　 结论：MRSA具有多重耐药的特点,未发现万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药株,红霉素耐药、林可霉素敏感或中介的菌株存在诱导耐药现象。
　　 二、MRSA SCCmec分型
　　 目的:了解天津某医院临床分离MRSA葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)类型。
　　 方法：SCCmec分型采用多重PCR(M-PCR)法:对已知SCCmeeⅠ～Ⅴ型中的9个特异性区域扩增。
　　 结果：SCCmec分型显示79株受试MRSA均为SCCmecⅢ型。
　　 结论：天津某医院临床分离MRSA SCCmec基因型均为Ⅲ型。
　　 三、同患者多部位分离金黄色葡萄球菌的PFGE分析
　　 目的:了解同一患者不同部位分离金葡菌的相关性。
　　 方法:11株金葡菌分别分离自5例金葡菌感染患者的血/痰/伤口分泌物、血/咽拭子、血/痰、血/痰、血/痰。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析:限制性内切酶SmaI酶切金葡菌基因组DNA后,进行脉冲场凝胶电泳。
　　 结果：PFGE分析显示,4组配对菌株酶切图谱条带数及条带大小分别一致,为同一株菌,1组配对菌株分离自伤口分泌物与分离自血液和痰的金葡菌酶切图谱相差7个条带以上,为不同菌株。
　　 结论：同一病人不同部位分离的会葡菌多为同一株菌。