腺病毒、柯萨奇病毒及其受体与大肠癌相关性研究

摘要

研究目的：探讨肠道病毒(EV)(含柯萨奇病毒B组(CVB))、腺病毒(ADV)及柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)在人大肠癌(CRC)中的表达分布情况，探寻病毒-受体-肿瘤三者之间的关系。分析病毒、受体与大肠癌的发生发展转移的相关性及在不同临床病理参数间的表达差异。
　　 方法：(1)应用免疫组织化学(IHC)方法检测大肠癌、癌旁正常组织中CAR蛋白的表达情况，分析其与大肠癌发生发展转移的相关性，及其在不同临床病理参数间表达的情况；(2)应用PCR/RT-PCR、细胞培养等方法检测大肠癌、癌旁正常组织及结肠癌细胞系Caco-2中ADV、EV(含CVB)的核酸(DNA/RNA)表达情况，分析其对CAR表达的可能影响及与大肠癌的关系。
　　 结果：
　　 (1)CAR的表达：CAR阳性染色为膜型。CAR的阳性表达量在大肠癌(结肠癌或直肠癌)与癌旁正常组织中差别具有统计学意义(直肠癌VS癌旁正常组织；结肠癌VS癌旁正常组织，P=0.000)，提示CAR的下调与大肠癌有关，并呈负相关(r=-0.736)，而结肠癌与直肠癌中差别没有统计学意义(直肠癌VS结肠癌，P=0.834)，在不同肿瘤部位(左半、横结肠、右半与直肠之间，P=0.989)之间差别无统计学意义。伴肝转移与不伴肝转移的大肠癌组织间CAR的表达水平差别有统计学意义(P=0.029)，提示CAR的表达与肝转移有关。CAR在肝转移灶较原发灶存在表达上调趋势，但无统计学差异(P>0.05)。在不同病理组织分化中(高、中、低分化)，CAR的表达水平差别有统计学意义(P=0.023)，提示CAR的表达与组织学分化有关。CAR的表达水平在性别、年龄(≤40岁VS>40岁)、Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤部位问差别无统计学意义(P>0.05)。
　　 (2)EV(含CVB)、ADV检测：在人大肠癌(2％)及癌旁正常组织(2％)中经RT-PCR、电泳、测序、BLAST比对证实分别存在柯萨奇病毒B组RNA片段，但经Vero细胞培养未见细胞病变(CPE)；在人大肠癌(2％)及癌旁正常组织(3％)中经PCR、电泳、测序、BLAST比对证实分别存在2例ADV1(分别为癌及癌旁)、3例ADV41(1例癌，2例癌旁)的DNA片段。但经人胚肾293细胞培养未见CPE。由此考虑可能存在病毒的部分片段，但为不完全的病毒核酸片段，不具有感染性。EV或ADV在大肠癌及癌旁正常组织中差别没有统计学意义(P>0.05)。结肠癌细胞系Caco-2经RT-PCR核酸检测及细胞培养均未检出EV或ADV。提示结肠癌细胞系Caco-2中无EV或ADV的感染。
　　 (3)EV(含CVB)或ADV与CAR的关系：CAR的表达水平与有否检出EV(含CVB)或ADV无关(P>0.05)。
　　 结论：
　　 (1)人大肠癌(结肠癌或直肠癌)组织较癌旁正常组织存在CAR的表达下调，提示在设计腺病毒载体基因治疗方案时应充分考虑CAR表达变化对疗效的影响。CAR的表达下调与组织分化、肝转移有关，而与年龄、性别、Dukes分期、肿瘤大小、肿瘤部位、淋巴结转移无关，提示CAR与大肠癌的恶性生物学行为有关。CAR在肝转移灶较原发灶存在表达上调趋势，但无统计学差异(P>0.05)，可能需要增加样本量。
　　 (2)人大肠癌与癌旁正常组织中可以检测到较低比率的CVB或ADV的核酸片段，但经证实没有感染性的完整的EV或ADV病毒(或核酸)，且EV或ADV在大肠癌与癌旁正常组织中表达无差异。
　　 (3)在分析CAR的表达下调因素中，认为下游受体CAR与上游的EV(含CVB)或ADV的感染无关。