人乳头瘤病毒分型及整合素抗体抑制尖锐湿疣复发的初步研究

摘要

尖锐湿疣(condyloma acuminatum，CA)是由人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)引起的，以发生在生殖器、肛周为主的性传播疾病(sexuallytransmitted disease，STD)。CA不仅发病率高，而且治疗后其复发率也很高。目前有多种针对CA的治疗方法，但任何一种方法都不能避免其复发。不同型的HPV感染可以引起不同的临床表现，对HPV进行分型将有利于临床疾病的诊断及预后的判定。整合素(integrin)是细胞黏附分子家族中重要的成员之一。通过大量对整合素与病毒感染关系的研究发现，多种病毒都能利用整合素作为病毒受体或共受体(co-receptor)进入宿主细胞。整合素α6主要在正常上皮组织基底层特异性表达，而HPV对宿主造成的损害，首先是以感染宿主上皮组织基底层为起始的，二者是否存在相关性?整合素α6在HPV感染过程中是否发挥作用?如果能在这个起始阶段将整合素的表达进行封闭，是否可使病毒对宿主细胞的黏附受到抑制?对这些问题的进一步研究将有助于从根本上阻断HPV病毒的感染和CA的复发。
　　 目的：①鉴定和评估PCR联合限制性片段长度多态性(RFLP)及基因测序技术对CA及四种外生殖器和肛周皮肤病进行HPV DNA检测和分型的可行性；②检测CA患者皮损处整合素α6 mRNA的表达，初步探讨其在CA的发病与复发中的意义；③探讨整合素α6单克隆抗体(GoH3)对HPV6/11病毒颗粒体外感染永生化人角质形成细胞株(HaCaT细胞)的影响。
　　 方法：①应用PCR-RFLP-基因测序技术对发生于外生殖器和肛周部位的CA、鲍温样丘疹病(BP)、鳞状细胞癌(SCC)、硬化萎缩性苔藓(LSA)和乳房外Paget病(EMPD)的皮损组织进行HPV DNA检测和分型；②采用RT-PCR方法测定初发和复发CA患者皮损处整合素α6 mRNA的表达；③应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测GoH3对临床CA组织中提取的HPV6/11病毒颗粒感染HaCaT细胞后HPV DNA载量的影响。
　　 结果：①50例经病理确诊的CA及四种外生殖器和肛周皮肤病标本中，共有35例检测出HPV DNA，其阳性率分别为CA100.0％(26/26)、BP47.1％(8/17)、SCC50.0％(1/2)、LSA0.0％(0/4)和EMPD0.0％(0/1)；HPV DNA阳性标本中，HPV6型19例，HPV11型3例，HPV16型8例，HPV6型+11型4例，HPV62型1例；基因测序结果与PCR-RFLP判定的HPV型别相符；②整合素α6在初发和复发CA皮损中mRNA的相对病毒载量分别0.79±0.16和1.07±0.29，均高于正常包皮组织的0.25±0.10，差异有统计学意义(P=0.001)；复发CA皮损中整合素α6的表达高于初发，差异有统计学意义(P<0.05)；③4组不同浓度的HPV6/11病毒颗粒感染HaCaT细胞后测得的HPV病毒载量不同(P=0.001)。当病毒颗粒浓度为106copies/ml时，HaCaT细胞被感染率为100％，且所测得的HPV载量高于其它3组(P<0.05)；当GoH3稀释倍数>1:100时，其对HPV感染HaCaT细胞的抑制率与其浓度成正比；但当稀释倍数<1:100时，再增加GoH3的浓度，其抑制率也未见明显增长；8例临床分离的HPV6/11病毒颗粒在加入GoH3之前感染HaCaT细胞的平均病毒载量为(5.81±2.51)×104copies/ml，加入GoH3后感染HaCaT细胞的平均病毒载量为(3.02±1.21)×104copies/ml，GoH3的平均抑制率为(46.9±4.7)％。
　　 结论：①PCR-RFLP方法可用于HPV DNA检测与分型；②整合素α6可能在CA发病和复发中发挥作用；③GoH3对HPV6/11型感染HaCaT细胞具有一定的抑制作用。