变形链球菌luxS基因在硫代谢中的功能研究

摘要

目的：建立变形链球菌标准株及luxS基因突变株的生物膜模型，观察比较两菌株不同生长时期的生物膜差异；通过对不同条件培养基中两菌株生长和生物膜差异的比较分析研究luxS基因在变形链球菌硫代谢方面的功能。
　　 方法：利用变形链球菌标准株及前期实验构建成功的luxS基因突变株，建立以圆形玻片为载体的生物膜模型，通过吖啶橙染色倒置荧光显微镜观察比较两种菌株不同时期生物膜形态的差异；采用营养补充实验培养两菌株，通过不同时期生长吸光度值(A)的测定比较两菌株的生长差异；利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察测定24 h两菌株生物膜厚度和平均荧光强度。
　　 结果：应用倒置荧光显微镜可对孔板内生物膜进行直接动态观察，镜下观两菌株生物膜形态多样；6 h开始出现细菌聚集成膜，18～24 h形成最佳，与玻片黏附牢固而不易冲掉；48 h标准株生物膜附着于玻片能力较突变株弱，容易整体滑落；两菌株生物膜标本经处理保存三个月后镜下观察形态未发生改变。分别在培养基中加入一定浓度的半胱氨酸时突变株生长及生物膜有所增长，但未及标准株水平；当分别加入一定浓度蛋氨酸及SAH时，突变株的生长及生物膜有所补充，但未及标准株水平；当加入一定浓度标准株上清液时突变株的生长及生物膜水平均明显增高且超过标准株水平；当分别加入SAM时两菌株的生长及生物膜厚度均有不同程度的降低。生物膜厚度与荧光强度无相关性。
　　 结论：变形链球菌标准株与luxS基因突变株生物膜具有不同的空间立体结构，形态多样，且在不同时期，生物膜形态，细菌间的相互作用及黏附力不同；luxS基因在变形链球菌中不但具有密度感应功能，在硫代谢方面也发挥着一定作用。