PTEN基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

摘要

目的：
　　 卵巢癌发病率在妇科恶性肿瘤中居第三位，而病死率却居首位，具有发现晚、转移早、预后差的特点，其发病机制仍不清楚。化疗是卵巢癌治疗的重要手段之一，对化疗耐药，尤其是对一线药物顺铂耐药是导致卵巢癌化疗失败的主要原因。因此，寻找有效的逆转耐药的治疗靶点在卵巢癌治疗中显得愈发重要而迫切。与张力蛋白同源的第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phosphatase andtensin homology deleted on chromosome ten，PTEN)是迄今为止发现的唯一脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶双性磷酸酶活性的抑癌基因，对细胞的生长、增殖、分化、凋亡、黏附、迁移和血管生成等多种生物学行为均有影响，与肿瘤的发生发展及化疗耐药的产生密切相关。本课题通过研究PTENmRNA与蛋白在上皮性卵巢癌细胞SKOV3/DDP及其亲本细胞SKOV3中的表达和改变，以了解PTEN与卵巢癌发生发展的相关性，此外通过分析顺铂对卵巢癌细胞生长抑制作用与PTEN表达的相关性，初步探讨PTEN与卵巢癌顺铂耐药的关系，为恶性肿瘤的早期诊断、新型抗肿瘤药物的研发、逆转耐药及寻找基因治疗靶点提供新的思路。
　　 方法：
　　 1.MTT法分别检测上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP和亲本细胞SKOV3的细胞生长曲线、顺铂IC50，并计算耐药指数。
　　 2.采用RT-PCR方法从mRNA水平检测卵巢癌细胞系SKOV3及其耐药细胞系SKOV3/DDP中PTEN的表达水平的差异。
　　 3.采用Western blot方法从蛋白水平检测卵巢癌细胞系SKOV3及其耐药细胞系SKOV3/DDP中PTEN的表达水平的差异。
　　 4.通过MTT法检测卵巢癌细胞系SKOV3及其耐药细胞系SKOV3/DDP对顺铂的敏感性。
　　 结果：
　　 1.细胞贴壁式生长，SKOV3细胞倍增时间为34.02小时，SKOV3/DDP细胞倍增时间为43.58小时。
　　 2.细胞经不同浓度DDP处理72h后，随着DDP浓度的增加，细胞抑制率增加，有明显剂量依赖关系，且耐药细胞株经顺铂作用后，细胞抑制率明显低于敏感株细胞(P<0.05)。
　　 3.SKOV3细胞顺铂IC50值为3.4658±0.0990μg/ml，SKOV3/DDP细胞顺铂IC50值为13.4752±1.7803μg/ml，SKOV3/DDP的耐药指数为3.89，可进行耐药实验。
　　 4.SKOV3、SKOV3/DDP细胞系均表达PTENmRNA，其表达水平分别为0.4470±0.0545、0.1995±0.1047，敏感细胞中的PTENmRNA的相对含量明显高于耐药细胞(P<0.05)。
　　 5.SKOV3、SKOV3/DDP细胞系中均表达PTEN蛋白，其表达水平分别为0.4528±0.1079、0.1882±0.0547，敏感细胞中的PTEN蛋白的相对含量明显高于耐药细胞(P<0.05)。
　　 6.DDP作用于SKOV3、SKOV3/DDP细胞72小时后，随着PTEN基因表达的降低，细胞对顺铂的耐药性增加，顺铂IC50值与PTENmRNA表达水平呈负相关(r=-0.760，P<0.05)，与PTEN蛋白表达水平亦呈负相关(r=-0.794，P<0.05)。
　　 结论：
　　 基因PTEN的功能检测表明，PTENmRNA与蛋白在体外培养的卵巢癌耐药细胞及亲本细胞中均表达，耐药细胞中的表达明显低于敏感株，其表达的降低与卵巢癌细胞顺铂耐药存在明确的相关性。