重型再生障碍性贫血患者外周血自然杀伤细胞亚群数量及功能变化的研究

摘要

目的：
　　 分析重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)前、后外周血自然杀伤(NK)细胞及其亚群占外周血淋巴细胞百分比、功能变化及其与造血功能相关性，探讨NK细胞在SAA发病机制中的作用。
　　 方法：
　　 用单克隆抗体四标法和流式细胞术(FCM)检测42例SAA患者[初治12例(初治组)、IST后恢复30例(恢复组)]外周血NK细胞(CD3-CD56+/CD16+)及其亚群[CD56bright(CD3-CD56brightCD16neg/dim)、CD56dim(CD3-CD56dimCD16bright)、CD3-CD56negCD16bright]占淋巴细胞的百分比、NK细胞胞膜抑制性受体(CD158a和CD158b)、NK细胞胞膜活化性受体(NKG2D和NKp46)及NK细胞胞浆穿孔素、颗粒酶B的表达，并与13名正常对照(对照组)做比较。分析上述变化与SAA患者外周血中性粒细胞百分比(ANC％)、淋巴细胞百分比(Lym％)、网织红细胞计数(Ret)及骨髓造血功能(增生程度、粒系百分比、红系百分比、巨核细胞数量、淋系百分比)的相关性。
　　 结果：
　　 1.SAA患者外周血NK细胞及其亚群占淋巴细胞百分比的变化
　　 ①SAA患者NK细胞百分比的变化初治组、恢复组、对照组NK细胞百分比分别为(10.30±6.08)％、(16.47±8.29)％、(19.45±6.88)％，初治组明显低于恢复组和对照组(均p<0.05)，恢复组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
　　 ②SAA患者CD56brightNK细胞亚群百分比的变化初治组、恢复组、对照组CD56brightNK细胞亚群百分比的中位数分别为0.11％、0.68％、0.53％，初治组明显低于恢复组和对照组组(均p<0.05)，恢复组与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
　　 ③SAA患者CD56dim NK细胞亚群百分比的变化初治组、恢复组、对照组CD56dim NK细胞亚群百分比分别为(9.62±6.04)％、(1.3.81±7.52)％、(18.21±7.16)％，初治组明显低于对照组(p<0.05)，初治组与恢复组比较差异无统计学意义(p>0.05)，恢复组与对照组比较差异亦无统计学意义(p>0.05)。
　　 ④SAA患者CD3-CD56negCD16brighNK细胞亚群百分比的变化初治组、恢复组、对照组CD3-CD56negCD16bright NK细胞亚群百分比的中位数分别为0.37％、0.79％、0.41％，恢复组明显高于初治组及对照组(均p<0.05)，初治组与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
　　 2.SAA患者外周血NK细胞功能的变化
　　 ①SAA患者NK细胞胞膜受体表达的变化SAA初治组NK细胞胞膜CD158a、NKG2D、NKp46中位表达阳性率分别为16.45％、95.68％、88.23％，SAA恢复组为19.34％、96.85％、82.97％，对照组为21.59％、96.13％、40.99％，初治组与恢复组NKp46表达阳性率明显高于对照组(均p<0.05)；初治组、恢复组、对照组NK细胞胞膜CD158b表达阳性率分别为(34.66±16.02)％、(39.13±17.75)％、(41.43±17.43)％，各组之间比较差异均无统计学意义(均p>0.05)。
　　 ②SAA患者NK细胞胞浆穿孔素、颗粒酶B表达的变化初治组、恢复组、对照组NK细胞胞浆穿孔素表达阳性率分别为(64.97±21.61)％、(66.14±20.73)％、(42.11±27.25)％，初治组与恢复组均明显高于对照组(均p<0.05)，初治组与恢复组比较差异无统计学意义(p>0.05)；初治组、恢复组、对照组NK细胞胞浆颗粒酶B表达的中位阳性率分别为96.43％、96.97％、92.88％，各组之间比较差异均无统计学意义(均p>0.05)。
　　 3.SAA患者外周血NK细胞及亚群占淋巴细胞百分比、功能与造血功能的相关性
　　 ①SAA患者NK细胞及其亚群百分比与造血功能的相关性NK细胞百分比与SAA患者ANC％、骨髓增生程度、骨髓粒系及红系百分比呈正相关(r分别为0.423、0.455、0.357、0.340，均p<0.05)，与Lym％、骨髓淋系百分比呈负相关(r分别为-0.411、-0.522，均p<0.05)；CD56brightNK细胞亚群百分比与SAA患者ANC％、骨髓增生程度、骨髓的粒系百分比及巨核细胞数量呈关正相关(r分别为0.609、0.412、0.517、0.362，均p<0.05)，与骨髓淋系百分比呈负相关(r=-0.435，p<0.05)；CD56dimNK细胞亚群百分比与SAA患者骨髓增生程度呈正相关(r=0.404，p<0.05)，与骨髓淋系百分比呈负相关(r=-0.411，p<0.05)；CD3-CD56negCD16brightNK细胞亚群百分比与SAA患者ANC％、Ret、骨髓增生程度、骨髓粒系百分比呈正相关(r分别为0.468、0.328、0.451、0.434，均p<0.05)，与Lym％、骨髓淋系百分比呈负相关(r分别为-0.389、-0.547，均p<0.05)。
　　 ②SAA患者NK细胞功能与造血功能的相关性NK细胞的CD158a、CD158b、NKG2D、NKp46、穿孔素、颗粒酶B表达与前述各造血功能指标均无相关性(均p>0.05)。
　　 结论：
　　 SAA患者外周血NK细胞、CD56bright、CD56dimNK细胞亚群占淋巴细胞百分比降低可能引起患者免疫耐受被破坏、T细胞功能亢进而导致造血功能衰竭；SAA患者外周血NK细胞NKp46、穿孔素表达增强可能是对NK细胞数量不足的一种“代偿”。