bFGF和TGF-β1对人牙龈成纤维细胞生物学活性的影响

摘要

目的：
　　 通过组织块法培养人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast，HGF)，观察HGF体外培养的生物学特性，探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastfactor，bFGF)和转化生长因子β1(transfer growth factor-β1，TGF-β1)单独及联合应用对HGF增殖、Ⅰ型胶原(collagenⅠ，ColⅠ)及糖胺多糖(glycosaminoglyca，GAG)分泌的影响，研究bFGF和TGF-β1单独及联合应用促进牙龈组织再生的作用。
　　 方法：
　　 1.采用组织块培养法进行人牙龈成纤维细胞的原代培养。2～6代细胞用于实验，倒置相差显微镜下观察细胞形态。抗角蛋白染色及波形丝蛋白染色进行细胞来源鉴定。
　　 2.实验分组：根据实验过程中人牙龈成纤维细胞培养液成分的不同进行分组，每组设8个复孔。(1)对照组：培养液为仅含5％FBS的DMEM；(2)bFGF干预组：培养液中除含5％FBS的DMEM，还分别含有bFGF0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml；(3)TGF-β1干预组：培养液中除含5％FBS的DMEM，还分别含有TGF-β10.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml。(4)bFGF联合TGF-β1干预组：优选bFGF和TGF-β1干预组中促细胞增殖最佳浓度进行联合培养。
　　 3.四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl terazolium，MTT)动态检测bFGF及TGF-β1对人牙龈成纤维细胞增殖活性的影响。酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assays，ELISA)及阿利新蓝法分别检测细胞增殖活性最强时bFGF及TGF-β1对HGF上清液中Ⅰ型胶原及糖胺多糖含量的影响。
　　 结果：
　　 1.采用组织块原代培养法成功培养出人牙龈成纤维细胞。倒置相差显微镜下观察可见，组织块接种3～7d后即有细胞从其周围游出，细胞呈长梭形，并围绕组织块呈放射状排列。传代后细胞生长迅速。经细胞来源鉴定，所培养细胞呈现抗角蛋白染色阴性，抗波形丝蛋白染色阳性，证实所培养细胞为中胚层来源的成纤维细胞。
　　 2.MTT法动态检测结果显示，接种后第3天开始bFGF和TGF-β1对HGF的增殖作用均较对照组明显(P<0.05)，在第5天时两种生长因子对细胞增殖的促进作用最强。两种生长因子促HGF增殖的最佳浓度分别为10ng/ml及1ng/ml，两者的联合作用对细胞的增殖作用更明显(P<0.05)。
　　 3.ELISA法检测显示，一定浓度范围内(0.1ng/ml～100ng/ml)，bFGF对于HGF的胶原合成具有抑制作用；而TGF-β1对其则有明显的促进作用。两种生长因子促细胞增殖最佳浓度联合应用时促进作用更明显(P<0.05)。
　　 4.阿利新蓝法显示，一定浓度范围内(0.1ng/ml～100ng/ml)，bFGF及TGF-β1对于人牙龈成纤维细胞的糖胺多糖合成均具有促进作用，两种生长因子促细胞增殖最佳浓度联合应用时效果更明显(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1.采用组织块原代培养法可成功培育出人牙龈成纤维细胞；细胞传代后，生长旺盛，分裂较快，能够满足实验中所需的大量细胞。
　　 2.bFGF和TGF-β1在一定浓度范围内都能促进人牙龈成纤维细胞增殖及糖胺多糖分泌，但最佳显效浓度不同；两种生长因子对于Ⅰ型胶原的分泌分别具有抑制和促进作用。
　　 3.一定浓度的bFGF和TGF-B1联合应用对于人牙龈成纤维细胞增殖及细胞外糖胺多糖的分泌具有协同促进作用；对于Ⅰ型胶原的分泌具有拮抗作用，促进作用占优势。