制附子干预大鼠佐剂性关节炎作用研究

摘要

目的:
　　类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一种慢性、对称性多关节炎为主要表现的自身免疫性疾病，病变呈持续、反复发作的过程，其主要病理变化为关节滑膜的慢性炎症，炎细胞浸润，滑膜血管新生和血管翳的形成，血管翳可向邻近软骨及骨组织侵蚀，导致骨质破坏，关节畸形和功能丧失。由于其病因及发病机制尚未完全清楚，至今仍无良好的治疗方法。目前临床上应用的非甾体类抗炎药，糖皮质激素等毒副作用大，且缺乏长期临床用药的安全性和耐受性，而针对某些细胞因子的生物制剂价格又较为昂贵，导致患者长期服用依从性差，不利于疾病控制，因此选择一种效价比好、低毒高效的药物显的尤为重要。近年来，祖国医学治疗RA的临床研究取得了一定的进展，疗效可靠，优势明显，尤其在减少西药毒副作用、降低复发率、提高疗效等方面作用肯定，显示了良好的前景。
　　RA属于中医“痹证”范畴，风寒湿邪侵袭，痰湿瘀阻经络是其主要病因机制，正气不足、肝肾亏虚是其发生发展的根本原因，制附子温经通络，是治疗类风湿疾病的重要药物之一，本实验以弗氏完全佐剂所诱导的佐剂性关节炎(adjuvantarthritis，AA)大鼠模型为基础，通过动态观察制附子用药2周、4周时对AA大鼠足肿胀率、血清NO、IL-1β水平以及滑膜血管新生及软骨破坏等病理过程中相关因子的影响，以期探讨该药治疗大鼠佐剂性关节炎的初步机制。
　　方法:
　　[1]建立佐剂性关节炎大鼠模型。
　　[2]通过观察制附子用药2周、4周时对佐剂性关节炎大鼠足肿胀率、血清NO、IL-1β、滑膜病理改变的影响，初步探讨制附子对佐剂性关节炎大鼠免疫炎症的干预作用。
　　[3]通过免疫组织化学染色的方法检测滑膜组织中VEGF、HIF-1α的表达，同时观察滑膜病理切片血管新生情况，探讨制附子对滑膜血管新生的影响。
　　[4]用免疫组织化学染色方法检测关节软骨细胞iNOS、MMP-3的表达，同时通过光镜下观察滑膜及软骨组织的病理改变，探讨制附子对大鼠佐剂性关节炎软骨破坏的影响。
　　结果:
　　1.成功建立大鼠佐剂型关节炎模型。模型组大鼠出现关节红肿，尾巴结节，耳朵红色斑点及结节，足肿胀率明显增高(p<0.05)，血清NO、IL-1β水平亦显著升高(p<0.05)。
　　2.制附子用药2周后可显著降低AA大鼠足肿胀率，与模型组比较呈显著性差异(p<0.05)；可有效降低血清NO、IL-1β水平(p<0.05)，用药组大鼠滑膜病理分级与关节炎指数评分，与模型组相比有统计学意义(p<0.05)。
　　3.制附子用药组与同期模型组相比，4周组可明显降低大鼠滑膜组织中VEGF的表达(p<0.05)，对滑膜组织中HIF-1α的表达无明显降低作用(p>0.05)，2周组对VEGF、HIF-1α的表达无统计学意义(p>0.05)；滑膜病理及血管生成评分结果显示，模型组大鼠滑膜组织大量纤维增生，血管增生及新生血管形成，滑膜增生夹杂新生的血管，用药4W组明显抑制了AA大鼠滑膜血管增生，减少血管新生，用药2W组与同期模型组比较无显著改善。
　　4.制附子用药4周组可明显降低大鼠滑膜组织中iNOS、MMP-3的表达，与模型比较有显著差异(p<0.05)，用药2周组对iNOS、MMP-3的表达亦有降低趋势，差异无显著性(p>0.05)；光镜下对滑膜和软骨进行病理指数分级显示，模型组模型组大鼠关节软骨破坏严重，软骨细胞固缩或者消失，出现软骨下骨侵蚀。用药4周组大鼠关节受到轻中度损伤，未见骨侵蚀，抑制了大鼠关节软骨破坏。用药2W组与同期模型组比较无显著改善。
　　结论:
　　1.制附子用药2周时可通过抑制促炎因子表达，降低AA大鼠足肿胀率，调整细胞因子的网络失衡，干预免疫炎症。
　　2.制附子用药4周组可明显抑制部分促血管新生相关因子的表达，减少滑膜血管新生；同时可降低部分软骨破坏相关因子的表达，对佐剂性关节炎大鼠关节软骨破坏起到一定的抑制作用，从而改善了AA大鼠病情。
　　3.制附子辛散温通，散寒止痛，用药2周时可有效抗炎，缓解AA大鼠症状，减轻足肿胀率；继续用药4周时，通过其补肾阳、益骨生髓作用，抑制了AA大鼠滑膜血管新生，减轻软骨破坏，达到治疗RA的目的。
　　本实验结果提示制附子具有减缓类风湿关节炎免疫介导炎症反应，改善滑膜血管新生和软骨破坏的作用，为单味中药多靶点治疗类风湿关节炎提供了实验依据。