5-Aza-CdR对人胰腺癌细胞系MiaPaca2生长及RUNX3基因甲基化的影响

摘要

目的：研究去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine，5-Aza-CdR)对人胰腺癌细胞系MiaPaca2的生长及Runt相关转录因子3(runt-relatedtranscriptionfactor3，RUNX3)基因甲基化和表达的影响，探讨RUNX3基因在胰腺癌细胞中失活的主要机制，进一步探索通过改变胰腺癌细胞RUNX3基因甲基化来治疗胰腺癌的新思路。
　　方法：(1)体外传代培养MiaPaca2胰腺癌细胞，经不同浓度5-Aza-CdR(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)处理24h～96h后，倒置显微镜下观察MiaPaca2细胞形态学变化；MTT法检测5-Aza-CdR对MiaPaca2细胞生长增殖的影响。(2)收集未经药物处理和经10μmol/L5-Aza-CdR处理72h的MiaPaca2细胞，提取两组细胞基因组DNA，甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测RUNX3基因甲基化的变化情况。(3)收集未经药物处理和经5μmol/L及10μmol/L5-Aza-CdR处理72h的MiaPaca2细胞，提取各组细胞总RNA，采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测RUNX3mRNA表达的变化。
　　结果：(1)经5-Aza-CdR处理后，MiaPaca2细胞的生长受到抑制，且随着药物浓度的增加及作用时间的延长其抑制作用越明显。(2)未经药物处理的MiaPaca2细胞RUNX3基因呈完全甲基化状态，而经10μmol/L5-Aza-CdR处理72h后，RUNX3基因表现为不完全甲基化状态，该基因甲基化得到部分逆转。(3)未经药物处理的MiaPaca2细胞未能检测到RUNX3基因mRNA表达，而经5μmol/L及10μmol/L5-Aza-CdR处理72h后，RUNX3mRNA可恢复表达，且表达水平与用药剂量存在一定量效关系。
　　结论：RUNX3基因甲基化状态与胰腺癌的发生发展有密切关系，异常甲基化可能是引起RUNX3基因表达缺失的主要机制。RUNX3基因在胰腺癌MiaPaca2细胞中为完全甲基化状态，RUNX3mRNA表达缺失，5-Aza-CdR可以逆转胰腺癌MiaPaca2细胞RUNX3基因的甲基化状态，重新激活其表达，从而发挥其抑制肿瘤细胞生长和诱导凋亡的作用。RUNX3基因可能成为胰腺癌的一个新的生物学标志和基因治疗的靶点，运用去甲基化药物改变胰腺癌细胞RUNX3基因的甲基化可为胰腺癌的生物学治疗提供一种新的思路。