替米沙坦对兔髂动脉再狭窄模型连接蛋白Cx43表达的干预作用

摘要

目的：
　　本研究旨在通过建立兔髂动脉再狭窄模型，观察髂动脉病理改变及连接蛋白43(Connexin43，Cx43)的表达情况及局部血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)水平变化，探肾素.血管紧张素系统(rennin-angiotensinsystem，RAS)与Cx在再狭窄发病过程中的可能的内在联系，进而对再狭窄机制做更进一步的探讨。同时加用血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(angiotensinⅡconvertingenzymeblockers，ARBs)进行干预，探讨替米沙坦对兔髂动脉再狭窄模型连接蛋白43表达的干预作用及可能的再狭窄的防治作用。
　　研究方法：
　　1、制作二次球囊损伤髂动脉再狭窄模型：将30只新西兰大白兔随机分为正常对照组、再狭窄模型组、替米沙坦组。适应性喂养1周后再狭窄模型组和替米沙坦组行第一次球囊损伤，术后继续喂养高脂饲料，4周后再狭窄模型组及替米沙坦组分别行第二次球囊损伤，术后继续喂以高脂饲料，其中替米沙坦组于术后第2天开始加用替米沙坦(5mg/kg·d)。4周后处死，处死前采血20ml，检测血脂：胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)水平及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)水平，处死后留取双侧髂动脉标本。
　　3、标本处理：所有标本均行HE染色及免疫组化染色；部分血管组织匀浆测定AngⅡ水平；部分血管组织匀浆用RT-PCR法对Cx43mRNA表达进行半定量测定。
　　结果：
　　1、血清学指标：再狭窄模型组与替米沙坦组均较正常对照组CHO、TG水平升高(P<0.05)；但是，替米沙坦组血清胆CHO水平略低于再狭窄模型组，但差异无统计学意义(P>0.05)。
　　2、组织学变化：大体标本显示正常对照组血管管壁为粉红色，管壁薄，质地软，HE染色可见内膜主要成分为内皮细胞(endothelialcells，ECs)与内弹力板，中膜血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)排列整齐；再狭窄模型组髂动脉质地变硬，管壁为白色，管壁增厚，管腔狭窄，HE染色见内膜明显增厚，内含大量VSMCs，内弹力板断裂、不完整；中膜VSMCs增生，排列紊乱，可见突破内弹力板向内皮下迁移现象。替米沙坦组血管壁为粉白色，较再狭窄模型组质地软、管腔增大，HE染色可见内膜增厚，内含大量VSMCs，内弹力板连续、完整。再狭窄模型组及替米沙坦组经免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，证实新生内膜主要细胞成分为VSMCs。在40倍显微镜下测量三组新生内膜厚度：与正常对照组(2.8457±0.1860)μm相比，再狭窄模型组(266.1179±70.2696)μm、替米沙坦组(68.2233±24.3754)μm明显增厚(P<0.01)；与再狭窄模型组相比，替米沙坦组内膜厚度变薄(P<0.01)。免疫组化染色结果显示三组均有Cx43表达。再狭窄模型组与替米沙坦组新生内膜处有大量Cx43表达，较正常对照组明显增强，且中膜VSMCs表达也较正常对照组明显增强。替米沙坦组Cx43表达量较再狭窄模型组减弱。
　　3、AngⅡ测定：与正常对照组相比，再狭窄模型组及替米沙坦组血管壁AngⅡ含量均增加(分别为P<0.05，P<0.01)，替米沙坦组AngⅡ水平较再狭窄模型组增加，但无统计学差异(P>0.05)。三组间血浆AngⅡ水平无明显差异(P>0.05)。
　　4、RT-PCR：与正常对照组及替米沙坦组比较，再狭窄模型组Cx43mRNA表达增加(P值均<0.01)；与正常对照组比较，替米沙组Cx43mRNA表达量增加，但无统计学差异(P>0.05)
　　结论：
　　1、本研究通过高脂饲料喂养联合兔髂动脉二次球囊损伤成功建立再狭窄模型，结果稳定、可重复性高。
　　2、再狭窄可能机制为：球囊损伤血管后，局部RAS激活，AngⅡ水平升高，通过血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1receptor，AT1R)介导Cx43mRNA表达上调，引起细胞间信息、能量、物质交换增加，促进VSMCs增殖、迁移，形成以VSMCs为主要细胞组分的新生内膜增殖，最终导致再狭窄发生。
　　3、替米沙坦作为新一代ARBs类药物，可能通过特异性阻断AT1R下调Cx43的表达进而抑制VSMCs增殖、迁移及新生内膜增殖，从而对PCI术后再狭窄的发生发展起到一定的防治作用。