HCV感染者基线的肝组织学活动指数、Treg、Th17细胞和IL28B基因型的特点及与快速病毒学应答的相关性

摘要

目的:
　　分析慢性丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染者基线的肝组织学活动指数(histological activity index，HAI)、Treg、Th17细胞及IL28B rs12979860基因型的特点;探讨三者与抗HCV快速病毒学应答(rapid virological response，RVR)可能的相关性。
　　方法:
　　收集2012年8月至2013年6月天津市第三中心医院门诊诊断的慢性丙型肝炎患者63例，记录临床一般情况（年龄、性别、身高、体重、可能的感染途径、既往病史、既往治疗情况）、治疗前临床及影像学资料（血常规、肝肾功能、血糖、血脂、甲状腺功能、抗核抗体、HCV RNA载量、HCV基因分型、IL28B rs12979860基因型、肝胆胰脾及双肾B超）。留取63例HCV感染者及同期健康体检者新鲜外周血标本。按患者意愿行肝穿活检组织检查者33例，留取标本。所有标本取材均通过我院伦理委员会审核，家属知情同意并签字。所有患者接受标准疗法(standard of care，SOC)抗HCV治疗，定期随访。
　　应用流式细胞术检测63例慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C，CHC)患者外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率，并与23例健康对照(healthy control，HC)进行比较。通过肝穿刺组织HE染色(Haematoxylin and eosin stain)评价HAI、肝脏炎症坏死分级(grade，G)及纤维化分期(stage，S)。免疫组织化学染色法(immunohistochemistry，IHC)标记肝穿组织中Foxp3+Treg细胞、IL17+Th细胞(Th17细胞)。
　　结果:
　　1.CHC组外周血CD4+T、CD4+/CD8+、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞频率分别为(28.16±8.295)％、(0.87±0.392)％、(6.83±2.209)％，均高于HC组的(23.57±5.492)％、(0.60±0.120)％、(4.86±0.740)％,P＜0.05，差异有统计学意义;CHC组外周血CD3+T、CD8+T细胞频率差异无统计学意义。
　　2.基线HCV RNA载量与浸润肝组织的Treg细胞低度正相关(r=0.353，P=0.047);与HAI、外周血T细胞亚群、浸润肝组织的Th17细胞、血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase，ALT)水平均无相关性。
　　3.HCV感染者基线ALT水平与浸润肝组织的Treg细胞呈低度负相关关系(r=-0.383，P=0.030);与外周血T细胞亚群、浸润肝脏的Th17细胞及HAI均无相关性。
　　4.HAI与浸润肝组织的Treg细胞低度负相关(r=-0.443，P=0.010)，与肝组织的Th17细胞低度正相关(r=0.404，P=0.020)，与外周血T细胞亚群无相关性。
　　5.随着炎症坏死分级的增加，肝组织Treg细胞数逐渐减少，肝组织Th17细胞数及HAI逐渐增加(P＜0.05）;而基线HCV RNA载量、ALT水平及外周血T细胞亚群，在各分级均无统计学差异（P＞0.05）。
　　6.随着纤维化分期的增加，HAI逐渐升高(P＞0.05）。肝组织Th17细胞在S1期(19.18±10.597)/HPF低于S2与S3期，而在S2与S3期无明显差异(28.00±14.830/HPF vs26.78±15.903/HPF)。基线HCV RNA载量、血清ALT水平、外周血T细胞亚群、肝组织Treg细胞在不同肝组织纤维化分期中，均无统计学差异(P＞0.05)。
　　7.基线HCV RNA、ALT、HAI、T细胞频率，在脂肪变组与无脂肪变组差异均无统计学意义（P＞0.05）。
　　8.IL28B rs12979860CC型与CT型相比，血清ALT水平、体重指数(body mass index，BMI)、胰岛素抵抗指数(Homeostatic model assessment of insulin resistance，HOMA-IR)、外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞频率、CD4+/CD8+比值、CD4+CD25Foxp3+Treg细胞频率，HAI、炎症坏死分级、纤维化分期、HCV RNA病毒载量、肝组织Treg细胞及Th17细胞，均无统计学差异，P＞0.05。
　　9.基线HCV RNA载量、HOMA-IR、HAI是慢性HCV感染者SOC治疗达到RVR的独立影响因素;血清ALT水平、外周血T细胞亚群的频率、肝组织Treg、Th17细胞及Treg/Th17比值在RVR组与NRVR组间，差异无统计学意义。
　　结论:
　　浸润肝组织的Treg及Th17细胞与慢性HCV感染者肝组织的炎症有关，Th17细胞与较重的肝组织纤维化有关。基线HCV RNA载量、HOMA-IR、HAI是快速病毒学应答的独立影响因素。IL28B rs12979860基因型与血清ALT水平、HCV RNA载量、肝组织炎症坏死、纤维化程度及RVR均无明显相关性。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、HCV感染者基线的HAI、Treg、Th17和IL28B基因型的特点

1．1 对象和方法

1．1．1 研究对象

1．1．2 入选标准

1．1．3 排除标准

1．1．4 主要仪器设备

1．1．5 主要试验试剂

1．1．6 主要试验试剂的配制

1．1．7 主要试验方法

1．1．8 统计学方法

1．2 结果

1．2．1 患者基线情况

1．2．2 CHC组与HC组外周血T细胞亚群的比较

1．2．3 CHC患者基线HCV RNA与血清ALT水平、外周血T细胞的相关分析

1．2．4 CHC患者基线ALT水平与外周血T细胞的相关分析

1．2．5 HAI与基线HCV RNA、ALT、外周血T细胞的相关性

1．2．6 肝组织炎症分级与基线HCV RNA、ALT、外周血T细胞频率

1．2．7 肝组织纤维化分期与基线HCV RNA、ALT、外周血T细胞频率

1．2．8 脂肪变与HCV RNA、ALT、外周血Treg细胞的关系

1．2．9 肝组织Treg、Th17细胞与HCV RNA、ALT的相关性

1．2．10 肝组织学表现与肝组织Treg和Th17细胞的相关分析

1．2．11 CHC患者IL28B基因型与HCV RNA、ALT、HAI、Treg、Th17的关系

1．3 讨论

1．3．1．外周血CD4+T、CD8+T细胞在HCV感染中的特点

1．3．2 外周血Treg细胞与HCV感染

1．3．3 血清基线ALT水平与HAI的相关性

1．3．4 浸润肝组织的Treg细胞与基线HCV RNA、ALT、HAI

1．3．5 浸润肝组织的Th17细胞与基线HCV RNA、ALT、HAI

1．3．6 IL28B rs12979860基因型与HCV感染

1．4 小结

二、HAI、Treg、Th17和IL28B基因型与RVR的关系

2．1 对象与方法

2．1．1 研究对象

2．1．2 治疗方案及随访

2．1．3 主要试验方法及仪器设备

2．1．4 相关指标判断

2．1．5 统计学方法

2．2 结果

2．2．1 随访情况

2．2．2 完成治疗4周随访患者的基线情况

2．2．3 RVR组与NRVR组患者各指标的比较

2．2．4 RVR可能的独立影响因素分析

2．3 讨论

2．3．1 基线HCV RNA与RVR的关系

2．3．2 基线HOMA-IR与RVR的关系

2．3．3 基线肝组织学表现与RVR的关系

2．3．4 Treg、Th17与RVR的关系

2．3．5 IL28B基因型与RVR的关系

2．4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 Treg与Th17细胞在慢性HBV／HCV感染中的研究进展

致谢