TNFSF15抑制小鼠颅内血管母细胞瘤的生长及出血

摘要

目的:手术切除是治疗人的颅内血管母细胞瘤的最佳方式，但是生长在关键部位（例如颅底或者脑干）及颅内多发的血管母细胞瘤阻碍的手术的实施，并且当前没有一种有效的药物治疗方式。通过一种有效的化学药物，来抑制血管母细胞瘤的异常过多增生的血管，也许能能够成为一种有效的治疗方式。
　　方法:通过免疫组织化学染色来检测人的血管母细胞瘤的VEGF/TNFSF15及小胶质/巨噬细胞的表达。利用bEnd.3细胞立体定向注射到小鼠的基底节，建立小鼠的血管母细胞瘤模型。通过HE染色来评价血管瘤及出血的体积，ELISA检测VEGF/TNFSF15的表达水平，CD68+，7/4+等免疫荧光染色分析炎性细胞对血管瘤的浸润情况。通过慢病毒转染bEnd.3细胞，致使该细胞高表达TNFSF15，通过RT-PCR，Western blotting及ELISA，分析VEGF/TNFSF15的表达水平。细胞增殖实验和管腔形成实验来评价bEnd.3细胞的体外血管新生能力。
　　结果:肿瘤坏死因子超家族成员-15（TNFSF15，又名血管内皮生长抑制因子）被认为是一种抗血管新生的因子，TNFSF15能够抑制血管内皮细胞的生长，诱导分裂期血管内皮细胞的凋亡，抑制血管内皮祖细胞向血管内皮细胞的转化。通过免疫组织化学染色发现，TNFSF15在正常人的微血管结构中高度表达，但是在人的血管母细胞瘤内极低的表达，上调血管母细胞瘤的TNFSF15也许能成为治疗该病的有效靶点。来源于小鼠内皮瘤的bEnd.3细胞系能够分泌大量的血管内皮生长因子(VEGF)，VEGF不但能够促进血管的生长也能促进血管的渗漏，但是b.End3细胞表达极少量的TNFSF15，研究发现bEnd.3细胞能在小鼠的皮下组织形成稳定的血管瘤。我们把b.End3细胞移植到C57BL/6小鼠的颅内，能形成与人的血管母细胞瘤病理结构极其相似的小鼠的颅内细胞瘤。与对照组相比，当把bEnd.3细胞移植到高TNFSF15表达的转基因小鼠颅内，能够形成较小体积的血管瘤和能减少血管瘤的出血，并且伴有较少的炎性细胞浸润和增多的周细胞募集。更重要的是，在TNFSF15高表达的转基因小鼠中，能够下调血管瘤中VEGF的表达水平。通过慢病毒转染bEnd.3细胞，促使bEnd.3细胞高表达TNFSF15，亦能发现抑制血管瘤的生长和出血，并也能下调VEGF的表达。体外研究亦证实TNFSF15能够抑制bEnd.3细胞的生长和下调VEGF的分泌。进一步的研究发现，通过使用死亡受体-3（DR-3）的拮抗剂来封闭DR-3的功能，发现TNFSF15不能发挥抑制bEnd.3细胞增殖和不能下调VEGF的表达，为此我们推论TNSF15能够通过DR3受体下调VEGF的表达水平，进而抑制血管瘤的生长及出血的发生。
　　结论:与正常的脑的微血管相比，我们发现在人的血管母细胞瘤标本中，存在高VEGF表达和极低TNFSF15表达的模式，这种异常的表达模式可能诱导了或者加重了血管母细胞瘤疾病的发生发展。在小鼠的颅内血管瘤的模型中，TNFSF15能够抑制血管瘤的生长和减少出血的发生，抑制血管瘤周围炎性细胞的浸润和促进周细胞的募集，并能下调血管瘤中VEGF的表达水平。机制研究发现，TNFSF15是通过或者是部分通过DR-3受体来下调VEGF的表达。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、在人的HB中，TNFSF15和VEGF存在相反的表达模式

1．1 对象和方法

1．1．1 对象

1．1．2 方法

1．2 结果

1．2．1 与正常脑血管相比，TNFSF15在人的血管母细胞瘤上表达极低

1．2．2 在人的血管母细胞瘤中，VEGF与TNFSF15的表达呈负性相关性

1．2．3 更多的巨噬细胞／小胶质细胞(CD68+)浸润到血管母细胞瘤的周围

1．2．4 CD68+细胞与VEGF的表达呈正性相关，TNFSF15负性相关

1．3 讨论

1．3．1 与正常脑血管相比，TNFSF15在人的血管母细胞瘤上表达极低

1．3．2 更多的巨噬细胞／小胶质细胞浸润到血管母细胞瘤的周围

1．4 小结

二、TNFSF15能够抑制小鼠颅内血管瘤生长及出血

2．1 对象和方法

2．1．1 对象

2．1．2 方法

2．2 结果

2．2．1 小鼠颅内血管母细胞瘤模型的建立

2．2．2 在TNFSF15高表达的转基因小鼠中，形成更小的血管瘤

2．2．3 在TNFSF15高表达的转基因小鼠形成的血管瘤中，TNFSF15能下调外周血VEGF的表达

2．2．4 TNFSF15抑制炎性细胞向血管瘤周围的浸润

2．2．5 TNFSF15增加了周细胞向血管瘤的浸润

2．2．6 上调b．End．3 细胞的TNFSF15表达水平，减少了血管瘤的生长及出血

2．2．7 高表达TNFSF15的bEnd．3 细胞形成的血管瘤能够下调瘤内VEGF的表达水平

2．3 讨论

2．3．1 TNFSF15抑制了小鼠血管瘤的生长及出血

2．3．2 在TNFSF15形成的血管瘤中，TNFSF15能够下调外周血VEGF的水平

2．2．3 TNFSF15抑制炎性细胞的浸润

2．2．4 TNFSF15促进了周细胞的募集

2．2．5 上调bEnd．3 细胞的TNFSF15能够抑制小鼠颅内血管瘤的生长和出血

2．2．6 高表达TNFSF15的bEnd．3 细胞能够下调血管瘤内VEGF的表达水平

2．4 小结

三、体外研究发现TNFSF15能够下调VEGF及机制研究

3．1 对象和方法

3．1．1 对象

3．1．2 方法

3．2 结果

3．2．1 上调TNFSF15能够下调VEGF的基因和蛋白表达水平

3．2．2 TNFSF15抑制bEnd．3 细胞的血管新生能力

3．2．3 TNFSF15通过DR3下调VEGF的表达水平

3．3 讨论

3．3．1 上调TNFSF15能够下调VEGF的基因及蛋白表达水平

3．3．2 上调TNFSF15能够抑制bEnd．3 细胞的血管新生能力

3．2．3 TNFSF15通过DR3来下调VERF的表达水平

3．3 小结

全文结论

论文创新点

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述

致谢