多发性骨髓瘤患者外周血Tregs变化以及hepcidin、GDF15在其贫血发病机制中作用的研究

摘要

目的：
　　探讨外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞(regulatory T cells，Tregs)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)中的变化及意义;并进一步观察hepcidin、GDF15在MM相关贫血发病机制中的作用。
　　方法：
　　研究对象为天津医科大学总医院自2012年12月至2013年10月初治MM患者、经治疗后完全缓解的MM患者以及正常对照者。第一部分采用流式细胞术检测30例初治、27例完全缓解(CR) MM患者以及25名健康成年人外周血CD4+T细胞、Tregs数量，并检测Tregs表面功能分子CTLA-4及其凋亡相关蛋白CD95、Bcl-2、Caspase3的表达，并分析其与临床特点及疗效的关系。第二部分用荧光定量PCR分别检测25例MM患者，15名正常对照者外周血单个核细胞HAMPmRNA、GDF15 mRNA的表达水平，并用ELISA方法检测其血浆hepcidin、GDF15、IL-6和EPO水平，本院临床检验中心检测铁蛋白、血清铁、总铁结合力和转铁蛋白水平。
　　结果：
　　第一部分初治组CD4+T细胞占外周血单个核细胞的比例为（29.41±12.56）％明显低于对照组（31.13±12.38）％（P＜0.05），Ⅲ期初治患者CD4+T细胞为（28.44±13.01）％明显低于Ⅰ、Ⅱ期患者（36.32±7.24）％(P＜0.05);初治MM组Tregs占CD4+T比例（9.34±4.74）％显著高于CR组（7.31±2.10）％和正常对照组（6.95±1.59）％（P＜0.05），初治Ⅲ期患者Tregs占CD4+T比例（10.57±5.21）％明显高于初治Ⅰ、Ⅱ期患者（6.78±2.34）％（P＜0.05）。初治组、CR组和正常对照组Tregs的表面CD95表达分别为(61.30±13.0)％、(59.65±9.68)％、（58.79±9.53）％，三者之间无统计学差异（P＞0.05），初治组CTLA-4表达（4.65±1.68）％高于CR组（2.83±1.72）％(P＜0.05)和正常对照组（1.64±0.85）％(P＜0.01)，CR患者CTLA-4高于正常对照组(P＜0.05)，初治组Tregs胞浆内Bcl-2水平（772.02±196.34）高于CR组（597.39±126.84）(P＜0.05)和正常对照组（456.93±74.75）(P＜0.01)，CR组高于正常对照组(P＜0.05)，初治组和CR组Tregs胞内Caspase3的水平(32.48±6.97)、(37.69±7.59)低于正常对照组(53.15±3.55)(P＜0.05)。初治组Tregs占CD4+T细胞比例与骨髓瘤数量呈正相关(P＜0.05)，且Tregs比例与治疗前后浆细胞下降值成反比（r=0.735，P＜0.05）。第二部分 MM患者外周血单个核细胞HAMP mRNA及GDF15 mRNA的表达分别是正常对照组的（4.32±2.45）倍、（2.41±1.02）倍（P均＜0.01），血浆hepcidin、GDF15、IL-6及EPO水平（分别为63.73±17.46ng/ml、1241.65±688.37pg/ml、11.12±14.46pg/ml、64.44±61.71μIU/ml）较正常对照组(33.25±16.05ng/ml、401.31±92.37pg/ml、2.92±1.97pg/ml、30.70±25.30μIU/ml)均明显升高（P均＜0.05）;MM患者HAMP mRNA表达与血清铁蛋白(r=0.68 P＜0.001)、血浆hepcidin水平(r=0.772 P＜0.01)呈正相关，与血红蛋白水平呈负相关(r=0.596 P＜0.01)，与GDF15 mRNA无相关性;MM患者GDF15 mRNA表达与血浆GDF15水平呈正相关（r=0.645 P＜0.01），与铁蛋白无相关性;EPO与GDF15有正相关趋势(r=0.376 P=0.06); MM患者血浆hepcidin和GDF15水平在接受VD方案化疗达到完全缓解时较治疗前有明显的下降(hepcidin65.60±21.83ng/ml vs44.33±14.50ng/ml、 GDF151544.83±592.82 pg/ml vs866.48±407.36 pg/ml）（P均＜0.05）。
　　结论：
　　第一部分 MM患者外周血Tregs水平升高，与瘤细胞负荷及疾病的分期呈正相关，与疗效呈负相关;Tregs水平增高与其抗凋亡能力增强有关;第二部分MM患者HAMP mRNA的过度表达参与铁代谢异常，是MM相关ACD发生的重要原因。对于MM患者GDF15可能不是铁代谢以及hepcidin的主要调节因素。此外，hepcidin与GDF15对于MM疾病的进展有监测价值。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、多发性骨髓瘤患者外周血Treg数量、功能以及凋亡相关蛋白水平的变化

1．1 对象和方法

1．1．1 研究对象

1．1．2 主要试剂和仪器

1．1．3 研究方法

1．1．4 统计学方法

1．2 结果

1．2．1．CD4+T细胞占外周血单个核细胞的比例、Tregs占CD4+T细胞的比例

1．2．2 MM患者Tregs表面CTLA-4、CD95以及胞浆内Bcl-2、Caspase3的表达

1．2．3 Tregs占CD4+T细胞的比例与临床特点及疗效的相关性

1．3 讨论

1．4 小结

二、hepcidin与GDF15在多发性骨髓瘤贫血发病机制中作用的研究

2．1 对象和方法

2．1．1 研究对象

2．1．2 主要试剂和仪器

2．1．3 研究方法

2．1．4 统计学方法

2．2 结果

2．2．1．MM患者外周血单个核细胞HAMP mRNA，GDF15 mRNA表达量

2．2．2 MM患者血浆hepcidin、GDF15、IL-6、EPO水平

2．2．3 实验室数据与临床资料相关性分析

2．2．4 MM患者血浆hepcidin和GDF15水平在接受6个疗程VD方案化疗完全缓解之后的变化

2．3 讨论

2．4 小结

全文结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述

致谢