槲皮素调节谷胱甘肽代谢的信号转导途径研究

摘要

目的：
　　通过体外动物实验，从 Keap1-Nrf2-ARE信号转导通路的角度探讨槲皮素（quercetin）对大鼠体内谷胱甘肽含量的影响，尤其是不同浓度槲皮素对谷胱甘肽代谢中的主要酶活性及基因水平，以及Keap1-Nrf2-ARE信号转导途径重要分子的的影响。全方位、多靶点地探讨槲皮素调节GSH代谢的信号转导机制。
　　方法：
　　以AIN-93饲料，在此基础上分别添加0.005％、0.05%和0.5%槲皮素喂养大鼠6周后，采用试剂盒测定大鼠血清中还原型谷胱甘肽（reduced glutathione， GSH）、氧化型谷胱甘肽（oxidated glutathione,GSSG）、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量，谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase,GST），丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性。使用试剂盒测定肝组织GSH和GSSG含量，GST、GR和GSH-Px酶活性。采用RT-PCR法测定肝组织GST、GSH-Px、GR、γ-谷胱酰半胱氨酸合成酶（gamma-glutamylcysteine synthetase， GCS）mRNA表达水平,。采用 Westerbolt法测定肝组织细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal knase,JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38)、磷酸化P38(p-p38)、(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap1）核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor2, Nrf2）蛋白表达水平。
　　结果：
　　1.各组大鼠体重增长量和每日平均摄食量均无统计学差别（P>0.05）。与对照组比，各实验组大鼠ALT、AST活性差异无统计学意义（P>0.05）。
　　2.与对照组相比，0.05%、0.5%槲皮素组大鼠血清GSH含量显著降低，而MDA含量和GSH-Px的活性显著增高（P<0.05）
　　3.在大鼠肝脏中，与对照组相比，0.05%和0.5%槲皮素组 GSH含量显著降低（P<0.05），0.05%和0.5%槲皮素组中的GR活性显著降低（P<0.05），与0.005%槲皮素组相比，0.05%槲皮素组和0.5%槲皮素组的GR活性显著降低（P<0.05）。与对照组相比，0.005%、0.05%和0.5%槲皮素组GST活性显著增高（P<0.05）。4.与对照组相比，0.005%槲皮素组 GST基因表达上调而 GCL基因表达下调，0.05%槲皮素组GR基因表达下调，0.5%槲皮素组GST、GCL和GR基因表达下调（P<0.05）。
　　5.与对照组相比，0.005%槲皮素组p-ERK蛋白表达增加，0.05%槲皮素组Keap1、p-JNK和p-ERK蛋白表达增加，0.5%槲皮素组p-ERK和p-p38蛋白表达增加而Nrf2蛋白表达降低（P<0.05）。
　　结论：
　　1.0.5%槲皮素未造成大鼠肝功能明显损伤
　　2.一定剂量槲皮素可以降低血中GSH的含量，并产生促氧化作用。
　　3.0.5%槲皮素通过抑制GR活性并下调GR和GCL mRNA水平，使GSH含量显著降低。
　　4.0.005%槲皮素使肝脏GST活性增加，并上调GST mRNA水平，0.5%槲皮素使肝脏 GST活性增加，但是使 GST mRNA水平下调，说明0.5%槲皮素可能使mRNA翻译效率增加。
　　5.0.5%槲皮素可能通过诱导 ERK和p38的磷酸化并使 Nrf2表达减少从而调节GSH代谢相关酶。

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缩略语

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、槲皮素对大鼠血清谷胱甘肽含量的影响

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、槲皮素对大鼠肝脏GSH及其代谢酶的影响

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

三、槲皮素对大鼠肝脏Keap1-Nrf2-ARE信号转导通路的影响

3.1对象和方法

3.2结果

3.3讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 槲皮素调节谷胱甘肽代谢作用研究进展

致谢