谷胱甘肽相关因素与氧化应激对儿童孤独症影响的研究

摘要

目的：
　　本研究旨在通过研究重金属铅水平对儿童孤独症的影响；通过研究谷胱甘肽的生物代谢水平、相应的遗传基因分布的差异性与儿童孤独症的关系；探讨氧化应激在儿童孤独症发病机制中的作用，为孤独症的病因学研究提供依据。
　　方法：
　　（1）研究重金属铅水平对孤独症患儿的影响：以来自于天津市六所启智学校以及一所私立孤独症早期干预培训机构的儿童为研究对象，实验分为孤独症组（53例）、智力低下组（105例）。采用紫外分光光度计法检测孤独症组和智力低下组的尿δ-氨基-γ-酮戊酸（δ-ALA）水平，t检验分别比较两组间δ-ALA水平，以此分析比较孤独症组与智力低下组的铅水平；相关分析尿δ-ALA水平与孤独症行为特征的关系。（2）研究谷胱甘肽生物代谢指标与儿童孤独症的关系：病例组为经过确诊的孤独症儿童（30例），对照组为正常儿童（66例），采用微量酶标法检测孤独症组和正常组儿童血清总谷胱甘肽（TGSH）、还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平，采用紫外分光光度计法检测两组儿童血清谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性水平，t检验比较孤独症组和正常儿童组血清 TGSH、GSH、GSSG和GST水平的差异性。（3）研究谷胱甘肽相关基因型与儿童孤独症的关系：病例组为来自于天津市五所启智学校和一所私立的孤独症早期干预培训机构的在校孤独症儿童（72例），正常组为来自天津市一所幼儿园的正常儿童（76例），口腔咽拭子提取DNA，采用聚合酶链反应(PCR)方法检测谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)基因和谷胱甘肽S-转移酶T1(GSTT1)基因多态性，χ2检验分析孤独症组和正常组儿童GSTM1基因、GSTT1基因和GSTM1、GSTT1联合基因分布频率；t检验、单因素方差分析不同基因型与GST活性水平的关系，分析基因多态性与孤独症行为特征的关系。（4）所有统计分析过程采用SPSS17.0软件包完成，检验水准α＝0.05。
　　结果：
　　（1）研究重金属铅水平对孤独症患儿的影响：孤独症组儿童和智力低下组儿童尿δ-ALA水平均高于正常参考值，且差异均有统计学意义（P＜0.05）；比较孤独症组与智力低下组儿童的尿δ-ALA水平，差异无统计学意义（P＞0.05）；分别按年龄1:1配比，年龄性别频数配比，比较孤独症组与智力低下组儿童的尿δ-ALA水平，差异均无统计学意义（P＞0.05）；孤独症儿童尿δ-ALA水平与儿童孤独症评定量表（CARS）中的非语言交流项目得分呈正相关（r=0.273，P=0.048）。
　　（2）谷胱甘肽生物代谢指标与儿童孤独症的关系：孤独症组儿童血清GSH、TGSH水平、GSH/GSSG比率均低于与正常组儿童，且差异均有统计学意义（P＜0.05）。孤独症组儿童血清GSSG水平高于正常组儿童，且差异有统计学意义（P＜0.05）。孤独症组儿童血清 GST活性水平与正常儿童相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　（3）谷胱甘肽相关基因型与儿童孤独症的关系：孤独症组与正常对照组儿童 GSTM1、GSTT1基因频率的分布，差异均无统计学意义（P＞0.05）。携带GSTM1基因缺失型的孤独症患者，血清GST活性水平低于正常基因携带者，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。孤独症组与正常对照组儿童 GSTM1、GSTT1联合基因型频率分布，差异均无统计学意义（P＞0.05）。携带不同GSTM1、GSTT1基因型的孤独症儿童在ABC、CARS得分之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　（1）重金属铅作为重要的外源性氧化物，铅浓度可能对孤独症的患病、社会交往能力具有影响。
　　（2）氧化应激与儿童孤独症的发生密切相关，谷胱甘肽相关的生物代谢指标（GSH、GSSG、TGSH）可以作为孤独症儿童氧化应激的重要标志物，血清GSSG水平增高，GSH和TGSH水平下降可能是孤独症发病的重要因素之一。
　　（3）GSTM1基因表达可能会影响GST活性。未发现GSTM1和GSTT1基因多态性与儿童孤独症有关。
　　（4）未发现GSTM1和GSTT1基因多态性对孤独症行为表现有影响。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1尿δ-ALA研究

1.1病例的选择

1.2对照的选择

1.3材料与方法

1.4统计学方法

1.5质量控制

2谷胱甘肽生物代谢指标检测

2.1病例的选择

2.2对照的选择

2.3 病例和对照的匹配条件

2.4材料与方法

2.5统计学方法

2.6质量控制

3谷胱甘肽相关基因的分子生物学检测

3.1病例的选择

3.2对照的选择

3.3材料与方法

3.4统计学方法

3.5质量控制

结果

1研究重金属铅水平对孤独症影响的结果

1.1研究对象

1.2孤独症组与正常参考值尿δ-ALA水平比较

1.3智力低下组与正常参考值尿δ-ALA水平比较

1.4不同条件下孤独症组与智力低下组尿δ-ALA水平比较

1.5孤独症儿童尿δ-ALA水平与ABC得分的关系

1.6孤独症儿童尿δ-ALA水平与CARS得分的关系

2孤独症与血清谷胱甘肽代谢指标的研究结果

2.1基本情况

2.2血清GSH、GSSG、TGSH、GST水平比较

2.3尿δ-ALA水平与血清GSH、GSSG、TGSH、GST水平的关系

3谷胱甘肽相关基因型研究结果

3.1基本情况

3.2 GSTM1、GSTT1基因多态性分析结果

3.3 GSTM1、GSTT1联合基因多态性分析结果

讨论

1重金属铅水平与儿童孤独症的关系

2谷胱甘肽相关生物代谢指标与孤独症的关系

3谷胱甘肽S-转移酶及其基因多态性与孤独症的关系

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:儿童孤独症的病因学研究

致谢