外源性肺泡表面活性物质对重度烧冲复合伤大鼠急性肺损伤的疗效研究

摘要

目的：烧冲复合伤是两种致伤因素（即烧伤和冲击伤）同时或相继叠加于机体而造成的一种复合损伤形式，其死亡率高，病情重，并发症多，救治困难，一直以来是临床亟待需要解决的问题。其中，急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是烧冲复合伤早期死亡的主要原因之一。肺泡表面活性物质（PS）是由肺泡 II型上皮细胞分泌的一种脂蛋白，具有使肺泡表面张力降低，维持肺泡稳定性，防止肺水肿，改善氧合的作用。本实验通过建立模拟大鼠烧冲复合伤模型，结合应用外源性肺泡表面活性物质，探讨其对重度烧冲复合伤肺损伤的作用，为临床治疗奠定基础。
　　方法：选取雄性SD大鼠300只，建立重度烧冲复合伤模型，用随机数表法分为假伤组（S）、烧冲复合伤治疗组（T）、烧冲复合伤对照组（C）。每组致伤前0h及伤后6h、24h、48h、72h共5个观察时相点进行观察，使用便携式血气分析仪行血气分析检测；应用大鼠肺功能仪器测定大鼠肺功能；免疫组织化学法检测肺组织髓过氧化物酶的表达的变化；肺组织病理学观察肺组织形态学变化；应用透射电镜观察肺的超微结构；用Western Blot法测定肺组织中肺表面活性物质结合蛋白A含量的时相变化以及caspase3的时相变化。
　　结果：
　　1、血气分析的变化： T组和C组大鼠伤后其氧分压（PaO2）显著下降，两组之间比较，T组显著高于C组（P＜0.05）；T组和C组大鼠伤后其二氧化碳分压（PaCO2）显著升高，两组之间比较，T组显著低于C组（P＜0.05）；T组乳酸含量在各时间点均明显高于C组（P＜0.05）。
　　2、肺功能的变化：伤后T组大鼠的深吸气量、中心气道阻力、肺顺应性及组织弹性在24h时显著优于C组（P＜0.05），与S组无统计学差异（P＞0.05）。
　　3、MPO的变化：T组与C组伤后各时间点均高于S组；C组大鼠肺组织MPO表达升高，浸润程度较多。
　　4、肺组织病理的变化：C组大鼠主要表现为局部肺泡腔破坏、消失，呈实性改变，纤维组织细胞增生，淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞浸润，部分肺泡腔尚存，肺泡上皮细胞脱落，肺泡间隔肿胀、增宽、可见出血，渐进性加重的肺出血及肺水肿，支气管上皮细胞肿胀，上述病变在伤后24h最为严重。T组大鼠大部分肺泡腔结构尚存，淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞浸润、水肿等病理改变程度明显较C组轻。
　　5、透射电镜（TEM）显示：S组大鼠肺组织超微结构正常。T组与C组比较AECⅡ的超微结构发生了系列显著变化。6h T组可见有中性粒细胞浸润，板层小体排空较C组少；24h T组较C组炎性细胞较少，板层小体密度有所增强，体积较均匀，环绕核仁排列；48h T组可见肺泡腔结构，板层小体排空较明显、融合，体积大小不等且不规则，与C组相比较轻，未见巨大板层小体，细胞膜结构有“胞吐”/“胞吸”现象；72h T组板层小体数目略有增加，未见巨大板层小体，体积大小尚均匀，排空略少，重新呈指环状绕核排列。
　　6、肺泡上皮细胞的TUNEL检测显示，6h，T阳性率=0.156，C阳性率=0.410；24h， T阳性率=0.129，C阳性率=0.340；48h，T阳性率=0.105，C阳性率=0.307；72h，T阳性率=0.110， C阳性率=0.316。说明各个时间点T阳性率均小于C阳性率。
　　7、Western Blot法显示，T组和C组SP-A从伤后6h起表达明显低于S组，两组之间比较，T组表达显著高于C组（P＜0.05）。
　　结论：重度烧冲复合伤大鼠伤后早期即出现急性肺损伤，经气管给予肺泡表面活性物质后，可显著改善大鼠肺泡的通气和换气功能，提高机体氧供，缓解急性肺损伤对全身的损害。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、重度烧冲复合伤大鼠动物模型的建立及肺损伤的检测

1.1对象和方法

1.1.1 研究对象：

1.1.2 主要试剂、药品及设备

1.1.3 实验模型场地及设备

1.1.4实验分组及方法

1.2 观察指标

1.2.1生命体征以及伤情变化

1.2.2肺组织大体解剖观察

1.2.3肺组织HE染色

1.3 结果

1.3.1中度冲击伤致伤参数

1.3.2烧冲复合伤大鼠一般生命体征变化

1.3.3烧冲复合伤大鼠肺组织形态学改变

1.3.4烧伤创面HE染色观察

1.3.5烧冲复合伤大鼠肺组织HE染色观察

1.3.6烧冲复合伤大鼠肺组织电镜观察

1.4 讨论

1.5 小结

二、外源性肺泡表面活性物质对重度烧冲复合伤大鼠急性肺损伤治疗作用效果观察的研究

2.1对象和方法

2.1.1 研究对象

2.1.2 主要试剂、药品及设备

2.1.3 实验模型场地及设备

2.1.4 实验分组及方法

2.2观察指标

2.2.1 肺组织大体解剖观察

2.2.2 不同分组不同时间点大鼠肺功能检测

2.2.3 不同分组不同时间点大鼠肺组织免疫组织化学法检测肺组织MPO

2.2.4 肺组织HE染色

2.2.5 不同分组不同时间点大鼠TEM样品制备（自动组织处理机程序）及观察

2.2.6不同分组不同时间点大鼠Western Blot流程

2.2.7 不同分组不同时间点大鼠TUNEL具体操作流程

2.3统计分析

2.4 结果

2.4.1 烧冲复合伤SD大鼠一般生命体征变化

2.4.2 烧冲复合伤SD大鼠生存率分析

2.4.3 烧冲复合伤SD大鼠血气分析改变

2.4.4 烧冲复合伤SD大鼠肺功能改变

2.4.5 烧冲复合伤SD大鼠肺组织形态学改变

2.4.6 烧冲复合伤SD大鼠肺组织HE染色观察

2.4.7 烧冲复合伤SD大鼠肺组织TEM观察肺组织超微结构

2.4.8 烧冲复合伤SD大鼠肺组织中SP-A的含量变化

2.4.9 烧冲复合伤SD大鼠肺组织MPO改变

2.4.10 烧冲复合伤SD大鼠肺泡上皮细胞TUNEL观察

2.5讨论

2.5.1 本实验中重度烧冲复合伤大鼠急性肺损伤主要表现

2.5.2 PS在重度烧冲复合伤大鼠肺损伤的治疗作用及可能的机制

2.6小结

全文结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:肺泡Ⅱ型上皮细胞在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征研究进展

致谢