慢性HBV感染者肝脏组织中FoxP3+Tregs和IL-17+T细胞的表达水平及意义

摘要

背景：已知CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在HBV病毒感染过程中起着关键的作用。辅助性T细胞17(T helper cell17, Th17)和调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)属于CD4+T淋巴细胞亚群。Th17细胞和Tregs细胞在自身免疫性疾病和机体防御过程中均发挥着举足轻重的作用，二者无论是数量上或者是功能上的改变都有导致自身免疫性疾病发生的可能性，总之Th17细胞和Treg细胞在很大程度上参与了免疫调节，与自身免疫性疾病如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎等的发病及进展有一定的关系。近年研究报道 Th17细胞和 Tregs细胞与急性乙型病毒性肝炎(Acute Hepatitis B, AHB)、慢性乙型病毒性肝炎(Chronic Hepatitis B, CHB)、乙肝肝硬化(HBV-associated Liver cirrhosis, HBV-LC)、HBV相关的肝功能衰竭(HBV-associated Liver Failure, HBV-LF)，甚至具有HBV背景的肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinnoma, HCC)等急性、慢性HBV感染相关的肝脏疾病的发生发展密切相关，它们在表达水平和功能上的改变有可能影响患者相关肝脏疾病的发展方向及预后。慢性HBV感染史一般被划分为免疫耐受期、免疫清除期、低复制期以及再活动期4个阶段，每个时期都具有不同的病毒学、生物化学指标以及相应的组织病理学改变，临床上也常以此对患者进行分期，从而指导治疗、判断预后。目前已经有关于HBV感染者在处于不同免疫状态时其体内CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的表达水平的研究，且这些实验一般都基于患者的外周血，然而HBV感染者外周血的情况并不能完全反应出肝脏组织学情况和病理学进展情况。部分基于肝脏组织学的研究又大都限于免疫耐受期和免疫清除期的患者，对于免疫耐受期、免疫清除期、低复制期和再活动期这4个阶段的整体研究尤其是基于肝脏组织学基础上的相关研究尚缺乏，因此我们的实验不仅对慢性HBV感染者肝脏组织中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、FoxP3+Tregs细胞以及IL-17+T细胞的表达水平进行检测，还分别对CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、FoxP3+Tregs细胞以及IL-17+T细胞在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期和再活动期中的表达水平进行了比较。
　　目的：⑴旨在检测慢性HBV感染者肝脏组织中的FoxP3+Tregs细胞、IL-17+T细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的表达情况并与健康对照组相比较。⑵分析FoxP3+Tregs细胞和IL-17+T细胞跟相关的临床指标以及IL-17+T细胞与肝脏的组织学炎症纤维化指数之间的关系。⑶对符合条件的慢性HBV感染者进行免疫学分期，并比较免疫耐受期、免疫清除期、低复制期、再活动期患者肝脏组织中FoxP3+Tregs细胞、IL-17+T细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的表达水平之间的差异并探讨其临床意义。
　　方法：选取71例慢性HBV感染者的肝脏组织进行连续切片，其中29例来自慢性乙型肝炎(chronichepatitis B,CHB)患者，42例取自乙肝肝硬化(HBV-relatedliver cirrhosis,HBV-LC)患者，运用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色的方法分别检测FoxP3+Tregs细胞、IL-17+T细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在肝脏组织中的表达情况，并与作为健康对照组(healthy control, HC)的34例正常肝脏组织进行比较，健康对照组的肝脏组织取自肝脏血管瘤周围的正常肝脏组织，或是肝脏囊肿周围的正常肝脏组织。
　　结果：①CHB及HBV-LC患者肝脏组织中FoxP3+ Tregs细胞，IL-17+T细胞，CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的表达水平均明显高于HC组，P<0.01；CHB患者肝脏组织中的FoxP3+Tregs细胞，IL-17+T细胞，CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞与LC患者比较，表达水平无统计学差异，P>0.05。②IL-17+T细胞随肝脏组织学炎症分级的上升有一定程度的升高(G3-G4 vs G1-G2, P=0.053)。③慢性HBV感染者肝脏组织中的 FoxP3+Tregs细胞与其外周血 AST正相关(r=0.382, P=0.028)，并随肝脏组织中CD8+T淋巴细胞的增加而增加(P<0.001)。④FoxP3+Tregs细胞、IL-17+T细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞中的任一细胞在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期和再活动期患者肝脏组织中的表达水平两两相比，均无统计学差异，P>0.05。
　　结论：⑴肝脏组织学角度进一步证实IL-17+T细胞与慢性HBV感染相关；⑵肝脏组织中FoxP3+Tregs细胞的增加对慢性HBV感染者肝脏组织损伤程度的加重也许能够起到预警作用；⑶IL-17+T细胞、FoxP3+Tregs细胞与慢性HBV感染者的免疫学分期尚无明确关系；⑷CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期和再活动期中表达水平的变化在一定程度上能反应各期的免疫状态。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1 对象和方法

1.1研究对象

1.2免疫状态分期标准

1.3主要仪器设备

1.4主要实验试剂

1.5主要实验试剂的配制

1.6实验方法

1.7免疫组织化学染色的结果判定

1.8统计学方法

2 结果

2.1 FoxP3+Tregs细胞、IL-17+T细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在慢性HBV感染者肝脏组织中的表达水平

2.2 IL-17+T细胞和FoxP3+Tregs细胞与慢性HBV感染者肝织损伤的关系

2.3 慢性HBV感染者CD8+T淋巴细胞与FoxP3+Tregs细胞的关系

2.4 FoxP3+Tregs细胞、IL-17+T细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在慢性HBV感染史各免疫分期中的表达情况

3 讨论

4 结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:Th17和Treg细胞在肝脏疾病中的研究进展

致谢

个人简历