牛奶引起食物不耐受组分鉴定及应用研究

摘要

目的：食物不耐受逐渐引起了现在临床医生及相关研究人员的广泛关注，若是确定患者机体内的不耐受组分则可以使疾病得到有效的预防和治疗。本文以牛奶为例，分析引起牛奶不耐受的蛋白组分并进行初步分离，进而用已确定的蛋白组分作为已知抗原，研制双抗原夹心法测定牛奶特异性抗体的检测方法以及生物素-链霉亲和素间接包被法测定牛奶中特异性免疫球蛋白G（IgG）的方法。
　　方法：在本研究中，选取由牛奶引起的不耐受患者血清（抗体）为探针，采用SDS-PAGE和酶免疫印记技术，分析能与不耐受患者血清相结合的蛋白区带确定为不耐受原。采用选择沉淀、凝胶过滤等技术纯化以确定不耐受的组分，经酶免疫印记和酶联免疫实验确定分离蛋白的免疫活性。双抗原夹心法分别包被抗原和标记抗原，经棋盘滴定法确定检测体系中最佳用量。间接包被法采用生物素标记牛血清白蛋白-链霉亲和素制备酶标反应板、并用生物素标记已知抗原，同时使用酶标记抗人IgG作为标记抗体；特异性IgG水平经双抗原夹心法获得的IgG标准曲线获得。
　　结果：牛奶中与不耐受血清发生结合的组分包括免疫球蛋白（Ig，160kDa）、牛血清白蛋白（BSA，67kDa）酪蛋白（CN，30kDa），同时β乳球蛋白（BLG，17kDa）以及α乳白蛋白（ALA,14kDa）也显示出与患者血清结合的反应。采用等电点沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等技术可获得酪蛋白、β乳球蛋白、α乳白蛋白和分子量较大的P1组分（牛血清白蛋白和免疫球蛋白）。
　　双抗原夹心法可用于牛奶特异性抗体测定，以美国Biomerica酶联免疫（间接法）作为参比方法，双抗原夹心酶联免疫法敏感度为93.3％，特异度为100%，准确度为96.7%；阳性预测值为100%，阴性预测值为93.7%。间接包被模式的食物特异性IgG酶联免疫法可应用于不耐受患者血清特异性IgG检测，同样也以美国Biomerica酶联免疫作为参比方法，牛奶特异性IgG测定敏感度为92.1%，特异度为90.0%，准确度为91.0%。建立的两种方法均与原有的方法比较符合程度都很高。
　　结论：
　　1、与食物过敏不同，牛奶中引起食物不耐受的成分是一些大分子蛋白：免疫球蛋白、牛血清白蛋白、酪蛋白等；同时不耐受个体间不耐受成分基本相同，个体间只是抗体效价的不同。
　　2、食物特异性IgG检测试剂的性能主要决定于所用的已知抗原。每种食物蛋白组分复杂，对食物蛋白鉴别和初步纯化是非常必要的。
　　3、双抗原夹心法可用于食物不耐受特异性IgG检测，与间接法相比具有较好的特异性。新型间接包被模式可以用于食物不耐受特异性IgG检测，与传统实验方法相比，本方法拥有较高的灵敏度和特异度，并且该方法不直接包被抗原，可以根据病人情况选择检测的不耐受原，实现个性化检测，从而达到减少病人的检测费用提高检出率的目的。

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缩略语

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、引起牛奶不耐受的蛋白组分鉴定

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、牛奶中不耐受蛋白组分的分离纯化

2. 1 实验材料

2. 2 实验方法

2.3结果

2.4讨论

2.5结论

三、双抗原夹心酶联免疫法检测牛奶特异性抗体的研究

3.1材料与方法

3.2 结果

3.3讨论

3.4小结

四、新型食物特异性IgG检测方法的研究

4.1对象和方法

4.2.结果

4.3讨论

4.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述：食物不耐受综述

致谢

个人简历