锌转运体在心肌肥厚中表达变化情况及锌离子在心肌肥厚中保护作用和机制研究

摘要

目的：
　　观察锌离子转运体在心肌肥厚中的表达变化情况及初探锌离子在心肌肥厚中保护作用和保护机制。
　　方法：
　　第一部分观察锌离子转运体在心肌肥厚中的表达变化情况：体外培养的H9c2心肌细胞，采用Ang II诱导H9C2心肌细胞24h建立心肌细胞肥大模型。采用腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚的大鼠动物模型。RT- PCR检测心肌细胞肥大标记性基因心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)和β-MHC mRNA的表达水平和多种锌转运体mRNA的表达水平。
　　第二部分初探锌离子在心肌肥厚中保护作用和保护机制：为探讨锌离子在心肌肥厚中的作用，Wistar大鼠被分为以下四组：假手术组（Sham）、腹主动脉缩窄术正常饮食组（AAC+N）、腹主动脉缩窄术高锌饮食组（AAC+H）和腹主动脉缩窄术低锌饮食组（AAC+L）。实验结束后处死动物，心脏外观拍片粗略估计心脏形态，以心脏重量与体重之比(HW/BW)、左心室重量与体重之比（LVW/BW）、心脏重量胫骨长度之比(HW/TL)、左心室重量与胫骨长度之比(LVW/TL)定量心肌肥厚的程度。RT- PCR检测心肌细胞肥大标记性基因心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)和β-MHC mRNA的表达水平，Western Blot检测IκB-α和NFκB蛋白表达水平。
　　结果：
　　1.RT-PCR结果显示，AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大组Zip8和Zip14 mRNA表达明显高于Control组,Znt6 mRNA表达少于Control组，但无明显统计学差异，其他锌转运体mRNA表达无明显差异。
　　2.RT-PCR结果显示，AAC诱导大鼠心肌肥厚组 Zip8,Zip11 Zip14 mRNA表达明显高于Control组,ZnT6 mRNA表达明显少于Control组，其他锌转运体 mRNA表达无统计学差异。
　　3.与Sham相比，AAC+N处理组大鼠HW/BW、LVW/BW、HW/TL、LVW/TL明显增加。与AAC+N相比，腹主动脉缩窄术高锌饮食（AAC+H）能明显减少HW/BW、LVW/BW、HW/TL、LVW/TL，而低锌饮食能逆转高锌的这一作用，说明补锌能够抑制AAC所致的心肌肥厚作用。
　　4.与Sham相比，AAC+N处理组大鼠心脏IκB-α蛋白表达显著减少，NF-κ B蛋白的表达显著增加。AAC+H组与AAC+N组相比，心脏IκB-α蛋白表达显著增加，NFκB蛋白的表达显著减少。而高锌饮食的这一作用被低锌饮食所逆转，说明补锌能够抑制NFκB蛋白的表达。
　　5.与 Sham相比，AAC+N处理组大鼠心脏细胞核 NFκB蛋白的表达显著增加。与AAC+N相比，腹主动脉缩窄术高锌饮食（AAC+H）能明显减少细胞核NFκB蛋白的表达。而高锌饮食的这一作用被低锌饮食所逆转，说明补锌能够抑制NFκB蛋白的细胞核转移。
　　结论：
　　1.AngⅡ诱导的肥大的H9C2心肌细胞中Zip8和Zip14 mRNA表达明显增加。
　　2.AAC诱导的大鼠肥厚的心肌中 Zip8,Zip11 Zip14 mRNA表达明显增加,ZnT6 mRNA表达明显减少。
　　3.补锌对AAC诱导的大鼠心肌肥厚具有保护作用。
　　4.锌通过抑制NFκB蛋白表达和细胞核转移而发挥抑制AAC诱导的大鼠心肌肥厚作用。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

实验创新性

材料和方法

1.1.1主要仪器设备

1.1.2主要试剂

1.1.3试剂盒

1.1.4抗体

1.1.5耗材

1.2方法

1.2.1实验对象

1.2.2实验基本溶液的准备

1.2.3 H9C2心肌细胞培养

1.2.4 大鼠实验模型制备和饲养

1.2.5心肌细胞蛋白表达水平的测定

1.2.6 细胞浆蛋白和细胞核蛋白分离

1.2.7 RT-PCR

1.3统计学分析

结果

1．锌转运体在AngⅡ诱导的肥大H9C2心肌细胞中表达变化

1．1 AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大

1．2 锌转运体在AngⅡ诱导H9C2心肌肥大细胞中表达变化

2．锌转运体在AAC诱导的肥厚的心脏组织中表达变化

2 . 1 AAC诱导大鼠心肌肥厚作用

2 .2心脏组织ANP、β -MHC mRNA表达变化

2．3 锌转运体在AAC诱导的大鼠肥厚心肌中表达变化

3 锌对AAC诱导的心肌肥厚的影响。

3.1锌离子对大鼠心脏形态的影响

3.2 心脏组织ANP、β -MHC mRNA表达变化

3.3 心脏组织Iκ B-α 和NFκ B的表达变化

3.4心脏组织核NFκ B水平变化

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:微量元素锌与心血管疾病的关系

致谢

个人简历