薰衣草油对昆明小鼠深Ⅱ度烫伤创面和瘢痕的治疗作用

摘要

目的： 选用昆明小鼠制备皮肤深Ⅱ度烫伤模型。探讨薰衣草油对深Ⅱ度烫伤皮肤的治疗作用。检测小鼠治疗前后烫伤创面愈合和瘢痕形成情况，初步探讨其作用机制。 方法： 选取32只昆明小鼠，随机分为四组，空白组6只、模型组6只、对照组10只，实验组10只。空白组不进行模型建造，模型组、对照组、实验组三组建立烫伤模型后分别外涂生理盐水、多磺酸粘多糖乳膏和薰衣草油进行治疗，两次/日，疗程28天。 空白组、模型组、对照组和实验组均使用腹腔注射10%水合氯醛(400mg/kg)对小鼠进行麻醉；麻醉后，8%硫化钠溶液脱毛上背部的，面积为2cm X4cm；于脱毛完毕恢复24h，将模型组、对照组、实验组的小鼠脱毛区域局部外用70%乙醇进行消毒；将水浴箱加热，待水温升至95℃并设置恒温，将小鼠脱毛区域置于恒温箱蒸汽口上端10cm处，于10s后移开，烫伤面积约等于脱毛面积，均通过蒸汽烫伤法建立深Ⅱ度烫伤模型。予0．9%氯化钠注射液2ml腹腔注射，以抗休克。 成功建立模型后，对模型组、对照组和实验组的小鼠分笼饲养，并分别外涂生理盐水、多磺酸粘多糖乳膏（喜疗妥）和薰衣草油进行治疗，两次/日，疗程28天。治疗开始后，每日观察以及文字记录创面愈合和瘢痕形成情况，并拍照存档。各组小鼠于第7天实施鼠尾取血，第28天实施眼球取血，将各组别血液离心后取出血清部分；第7天和第28天剪下各组别小鼠部分瘢痕组织，离心后取出上清液。将以上收集的标本分别装入无菌离心管，标记后存入-80℃冰箱冷藏。 待所有标本取齐后，从冰箱取出血清和组织上清液标本，于室温（25℃）解冻，行ELISA检测标本中TGF-β1、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、IL-10的含量变化。于治疗第28天，剪下部分瘢痕组织并用10%中性甲醛固定后做好标记，制作病理切片，行脱水，HE染色。切片扫描。观察创面及瘢痕形成情况的组织学形态改变，测量并记录各组标本组织的表皮及瘢痕厚度。以400μm为单位，计算单位面积毛囊个数，计数10个视野取平均值，评估毛囊生存情况。采用统计软件SPSS16.0行数据分析，计算数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验和单因素方差分析。当方差齐性时，多组间均数比较采用方差分析LSD；当方差不齐时，采用KW。采用LSD方法对表皮厚度、瘢痕厚度两指标进行组间比较分析；采用KW H检验对毛囊指标进行组间比较描述，指标描述采用M（P25-P75）描述。均以P＜0.05表示差异有统计学意义。 结果： 1.建立深Ⅱ度烫伤模型 1.1 模型组、对照组、实验组的小鼠均出现深Ⅱ度烫伤的皮肤创面体征及病理组织学表现。 1.2 空白组TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为64.3±9.25ng/ml、48.48±3.70ng/ml、1.35±0.04。 2.各组别病程发展 2.1 模型组：创面肉眼观察颜色紫红，形状不规则，触之较硬且表面不平整。创面炎症相对重，愈合慢。表皮、瘢痕及毛囊剧烈增生，表皮厚度为78.3±36.0μm、瘢痕厚度1129.2±495.1μm、单位面积内毛囊数量3.5个。 建立模型后第7天的TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为129.19±10.29ng/ml、58.54±4.17ng/ml、4.02±0.24；第28天分别为249.80±7.35ng/ml、67.25±2.83ng/ml、7.31±0.47，各标本值均随着病程进展逐渐升高，且明显高于正常（P＜0.05）。 2.2 对照组：创面肉眼观察颜色粉红，形状较规则，触之质软且表面较为平整。创面处炎症相对轻微，愈合相对快，毛囊、表皮及瘢痕厚度增生较轻，表皮厚度为74.4±20.6μm、瘢痕厚度970.6±301.7μm、单位面积内毛囊数量3个。 建立模型后第7天TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为265.58±9.95ng/ml、73.64±8.10ng/ml、3.64±0.33；第28天分别为116.40±19.78ng/ml、59.70±3.59ng/ml、2.29±0.29，各标本值均在治疗第7天显著升高，于治疗第28天大幅度下降，略高于正常（P＜0.05）。 2.3 实验组：创面肉眼观察呈鲜红色，形状较规则，触之质软且表面平整。创面炎症轻，愈合快；表皮、毛囊及瘢痕厚度增生相对弱（P＜0.05），表皮厚度为54.3±13.3μm、瘢痕厚度424.5±119.5μm、单位面积内毛囊数量1个。 建立模型后第7天的TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前胶原比值分别为303.57±8.03ng/ml、88.08±3.90ng/ml、3.20±0.27；第28天分别为69.45±11.31ng/ml、50.06±6.16ng/ml、1.79±0.51，各标本值均在治疗第7天剧烈升高，于治疗第28天基本降至正常（P＜0.05）。 结论： 1.昆明小鼠可以制备皮肤深Ⅱ度烫伤模型，且能模拟人体皮肤烫伤在组织学及分子生物学上的特征性改变。 2.烫伤小鼠体内血清TGF-β1，IL-10，组织Ⅰ，Ⅲ型前胶原各指标表达与创面愈合呈正相关。薰衣草油通过改善机体血清TGF-β1，IL-10表达，调节组织内Ⅰ/Ⅲ型前胶原的表达，显著促进昆明小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合及抑制瘢痕形成。

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