分层自组装磁性复合功能药物载体系统的研究

摘要

本文先以EDC为偶联剂，将硬脂酸接枝到赖氨酸改性的壳聚糖主链的胺基上，得到一系列硬脂酸取代度相同(4.9％)而赖氨酸取代度不同(2.3％，4.4％，9.6％)的双亲性壳聚糖衍生物(SA-LysCS)，利用FT-IR，1H-NMR对其结构进行表征。SA-LysCS在水相中可自组装形成自聚集体。以芘为荧光探针对其自聚集行为进行了研究，结果显示制得的自聚集体具有较之小分子表面活性剂较低的CAC(1.1×10-2-5.3×10-2mg/mL)，表明自聚集体可在水相中形成稳定的胶束。且随着赖氨酸取代度的增加，CAC值随之增大。以激光粒度仪对自聚集体水相中的粒径分布进行了研究，发现其平均粒径随着赖氨酸取代度的增大有所增加(132.6-300.2nm)。 用中性脂质体包载磁流体，成功制备了磁性中性脂质体，后将其与上述制备的高分子胶束复合，制备出分层自组装胶束，通过X光电子能谱分析(XPS)、透射电子显微镜(TEM)和VSM法磁性能分析等手段对其进行表征。在此基础上，将靶向性物质叶酸和跨膜多肽Tat与载体连接，构建出同时具有跨血脑屏障、磁性和受体介导复合靶向功能的分层白组装载体系统，并用差量法定量测定出载体所携带的Tat和叶酸含量。 对上述载体进行放射性99Tc标记，用SPECT考察了上述载体载pGL3质粒在正常SD大鼠体内脑、心、肺、肝、脾、肾、膀胱等脏器的分布情况，并详细考察了Tat、叶酸(FA)和外加磁场对载体在大鼠脑及各脏器分布产生的影响。 将抗癫痫药物丙戊酸钠(VPA)与载体连接，并用SPECT在癫痫模型鼠中证实其可成功跨越血脑屏障；与其它对照组比较，Tat-FA-VPA-分层自组装磁性复合功能载体(Tat-FA-VPA-LSMM)的脑内分布最高。 在SD大鼠上成功建立了癫痫动物模型，并根据体内分布的结果，选择载体Tat-FA—VPA-LSMM进行癫痫治疗的动物实验。经过对治疗前后脑电图、病理、细胞凋亡和免疫组化等指标检测，证实Tat-FA-VPA-分层自组装载体治疗组的治疗效果要优于单纯药物治疗组和生理盐水对照组。 综上所述，本研究所制备的分层自组装磁性复合功能载体可用于跨血脑屏障治疗腑部疾病的基因和药物载体。

目录

文摘

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第一章绪论

1.1前言

1.2基因载体

1.2.1病毒性基因载体

1.2.2非病毒类基因载体

1.3作为基因载体的壳聚糖的改性

1.3.1季铵化壳聚糖

1.3.2糖基化壳聚糖

1.3.3 N-烷基化壳聚糖及其衍生物

1.4双亲性聚合物自组装胶束

1.5分层自组装超微胶束

1.5.1分层自组装超微胶束的组成

1.5.2分层自组装超微胶束的制备

1.6分层自组装超微胶束的功能化

1.7具有跨膜和复合靶向功能的分层自组装磁性载体的构建

1.7.1叶酸受体介导肿瘤靶向治疗

1.7.2 Tat多肽介导纳米粒子跨膜

1.8本课题的研究意义及研究内容

第二章分层自组装磁性复合功能载体的制备

2.1引言

2.2实验部分

2.2.1实验原料及仪器

2.2.2分层自组装磁性复合功能载体的表征与性能测试方法

2.3分层自组装磁性载体的制备与表征

2.3.1双亲性硬脂酸改性赖氨酸-壳聚糖(SA-LysCS)的合成

2.3.2双亲性高分子自组装纳米胶束的制备

2.3.3超微磁性粒子的制备

2.3.4磁性中性脂质体的制备

2.3.5分层自组装磁性载体的制备

2.3.6结果与讨论

2.4分层自组装复合功能载体的构建

2.4.1叶酸的引入

2.4.2跨膜蛋白Tat的引入

本章结论

第三章分层自组装磁性复合功能载体的体内分布

3.1引言

3.2分层自组装磁性复合功能载体的体内分布实验

3.2.1分层自组装磁性复合功能载体的放射性标记

3.2.2分层自组装磁性复合功能载体载基因体内分布

3.3结果与讨论

3.3.1磁场作用时间对载体跨血脑屏障(BBB)的影响

3.4载抗癫痫药物丙戊酸钠载体在癫痫模型鼠体内的分布

3.4.1载丙戊酸钠复合功能磁性载体的制备及表征

本章结论

第四章癫痫病治疗动物实验

4.1引言

4.2癫痫模型的建立

4.2.1模型建立

4.3实验分组

4.4动物实验过程

4.4.1给药治疗

4.4.2脑电记录

4.4.3动物取材

4.4.4石蜡包埋和切片

4.4.5病理HE染色和Nissl染色

4.4.6 GFAP免疫组化染色

4.4.7海马区神经细胞凋亡检测

4.5结果与讨论

4.5.1模型建立结果

4.5.2脑电分析

4.5.3 HE染色结果对比

4.5.4 Nissl细胞染色结果

4.5.5 GFAP免疫组化染色结果

4.5.6 CA3区神经细胞凋亡检测结果

本章结论

第五章全文结论

参考文献

发表论文和科研情况

致谢