痹祺胶囊组方配伍对细胞色素P450同工酶活性的影响

摘要

研究目的：痹祺胶囊是应用现代药物制剂理论精制而成的新药，主要用于风湿、类风湿性关节炎，颈椎病、肩周炎等疾病的治疗。具有疗效好、见效快、止痛作用好的特点。目前对于痹祺胶囊组方配伍的科学性及用药安全性尚未见报道。本实验是国家自然科学基金委重点项目(No.30630075)的重要组成部分，通过体外实验及体内实验两方面全面评价痹祺胶囊配伍组方的基于细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP450)的安全性和科学性。
　　 研究方法：采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)建立同时评价CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A酶活性的全新高通量分析方法，同时提取并检测5种特异性探针药物及其相应代谢产物，其中包括非那西丁/扑热息痛、甲苯磺丁脲/4-羟基甲苯磺丁脲/羧基甲苯磺丁脲、4'-羟基美芬妥英、右美沙芬/右啡烷、咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑。采用Gentest高通量重组CYP450酶抑制剂筛选试剂盒分别考察痹祺全药提取物、君药有效成分马钱子碱和士的宁及其与使药甘草的有效成分甘草酸和甘草次酸相结合对以上5种CYP450的体外抑制作用。采用“Cocktail”一点法测定痹祺胶囊配伍组分对Wistar大鼠体内5种CYP450的诱导和(或)抑制作用，并全面分析配伍规律。
　　 结果：本实验建立了全新“Cocktail”探针药物组合(非那西丁+甲苯磺丁脲+美芬妥英+右美沙芬+咪达唑仑)，并建立了同时检测以上五种探针药物及其相应代谢产物的LC-MS/MS分析方法。马钱子碱和士的宁对5种CYP450基本没有体外抑制作用。马钱子碱和士的宁分别加上甘草酸和甘草次酸后对CYP2C9和CYP2C19可能存在体外抑制作用。大鼠体内实验结果显示，痹祺胶囊组方存在基于CYP450的配伍规律，与空白对照组比较，君药+臣药组、君药+使药组、君药+臣药+佐药组、君药+臣药+使药组、君药+佐药+使药组及痹祺胶囊全药组对CYP1A2具有显著诱导作用；君药+臣药组、君药+臣药+佐药组、君药+臣药+使药组及痹祺胶囊全药组对CYP2C9具有显著诱导作用。
　　 结论：本实验所建立的“Cocktail”探针药物组合为首次将此五种探针药物进行组合的全新方法，之前未见报道。痹祺胶囊组方存在基于CYP450较为显著的配伍规律，此规律为进一步探讨君药、臣药、佐药和使药在痹祺胶囊组方中的配伍作用地位，全面综合地分析与评价痹祺胶囊组方配伍的科学性奠定良好基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章全新Cocktail探针药物组合的建立与方法学确证

1.1前言

1.1.1“Cocktail”探针药物法的应用

1.1.2本实验中全新探针药物组合的建立思路

1.2研究方法

1.2.1药品与试剂

1.2.2实验动物

1.2.3实验仪器

1.2.4 LC-MS/MS条件

1.2.5溶液配制

1.2.6样品处理方法：

1.2.7方法学确证

1.2.8本Cocktail组合中探针药物之间的相互作用研究

1.2.9数据处理

1.2.10统计分析

1.3实验结果

1.3.1方法学确证结果

1.3.2本Cocktail组合中探针药物之间的相互作用研究

1.3.3统计结果

1.4讨论

1.5结论

第二章痹祺胶囊主要成分对5种CYP450同工酶的体外抑制实验

2.1前言

2.1.1 P450的结构和命名

2.1.2主要P450亚型的基本特征

2.1.3药物的体外代谢研究的实验体系

2.1.4痹祺胶囊简介及本实验目的

2.2实验材料

2.2.1实验药物和试剂：

2.2.2高通量重组CYP450酶抑制剂筛选试剂盒

2.2.3实验仪器

2.3实验方法

2.3.1待测药物的分组与制备

2.3.2高通量重组CYP450酶抑制剂筛选试剂盒实验材料的分装

2.3.3抑制实验(以待测药物对CYP3A4的抑制实验为例)

2.3.4数据处理

2.4实验结果

2.5讨论

2.6结论

第三章痹祺胶囊配伍组分对体内CYP450同工酶活性的影响

3.1前言

3.2材料

3.2.1仪器

3.2.2原料与试剂

3.2.3实验动物

3.3方法

3.3.1拆方分组

3.3.2药物制备

3.3.3 LC-MS/MS条件

3.3.4样品处理和分析

3.3.5动物实验方案

3.3.6数据处理

3.3.7统计分析

3.4实验结果

3.4.1血尿药浓度测定结果及酶活性测定结果

3.4.2统计结果

3.5讨论

3.5.1体内实验结果讨论

3.5.2体内实验结果与体外实验结果的比较

3.6结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

致 谢