5-脂氧化酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用

摘要

炎症是引起动脉粥样硬化、肿瘤、骨质疏松、哮喘等疾病的重要生理过程,5-脂氧化酶是催化花生四烯酸生成白三烯类炎症介质的关键酶,是抗炎药物研发的重要靶点。
　　 本研究以花生四烯酸为底物,以2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸为反应物,建立了非铁离子螯合机制和铁离子螯合机制的两种5-脂氧化酶抑制剂的高通量药物筛选模型。经对酶浓度、反应时间等多种条件的实验、优化和阳性药验证,该模型具有较高的灵敏度和稳定性。
　　 利用建立的非铁离子螯合机制筛选模型,从15200株真菌代谢产物中筛选得到35个阳性菌株,从16702株放线菌代谢产物中筛选得到23个阳性菌株。利用建立的两种筛选模型从2833个单体化合物中筛选到9个有活性的化合物。化合物F01WB287C为铁离子螯合型抑制剂,其IC50值为2μM。化合物F02ZA2396B为非铁离子螯合型抑制剂其IC50值为5.36μM。化合物F02ZA2554A、1833-7、1833-27、F01WA960A、F01WB1695B、1914-1和868通过铁离子螯合和其它机制共同起抑制作用。9个化合物中F02ZA2554A、F01WA960A和F01WB1695B对5-脂氧化酶的抑制活性和阳性药齐留通相当。本研究筛选到的9个化合物对5-脂氧化酶的抑制活性均未见报道。
　　 本研究建立的5-脂氧化酶抑制剂高通量药物筛选模型以及筛选得到的9个新的5-脂氧化酶抑制剂为抗炎药物的研究和开发打下了坚实的基础。