天花粉蛋白与核糖体蛋白L10a及细胞质膜蛋白的结合研究

摘要

天花粉蛋白是一种Ⅰ型核糖体失活蛋白，具有多种生物学活性。本文用天花粉蛋白亲和层析柱分离到一个结合蛋白，通过质谱鉴定为核糖体蛋白L10a。体外结合实验证实重组的核糖体蛋白L10a能够与天花粉蛋白特异的结合。表面等离子共振实验显示天花粉蛋白与核糖体蛋白L10a之间具有较高的亲和性：解离平衡常数为7.78nM。天花粉蛋白突变体的研究进一步表明这种特异结合与天花粉蛋白的核糖体失活活性相关。这一发现对于理解天花粉蛋白失活核糖体以及其发挥生物学活性的机制提供了新的思路。 天花粉蛋白用于中期流产具有很高的成功率(94﹪)和很低的副作用。这种流产作用可能是通过天花粉蛋白直接和特异的损伤人胎盘合胞体滋养层细胞而进行的。MTT实验显示人绒毛膜癌细胞对天花粉蛋白具有极高的敏感性，同时天花粉蛋白能够诱导人绒毛膜癌细胞胞内钙离子浓度波动和凋亡。放射配体结合实验显示天花粉蛋白与人绒毛膜癌细胞的结合具有明显的饱和性，表现为双位点结合特性：一个高亲和性结合位点(Bmax1=10，351±2400sites/cell，Kd1=0.2358±0.1nmol/L)和一个低亲和性结合位点(Bmax2=102，037±31，500sites/cell，Kd2=10.41±3nmol/L)。流式细胞仪也证实了这种特异结合。使用生物素标记人绒毛膜癌细胞的表面蛋白，通过固定化的亲和素亲和纯化增溶的生物素化的膜蛋白以及天花粉蛋白亲和胶体pull-down实验鉴定到两个天花粉蛋白结合蛋白(50kDa，60kDa)，这两个蛋白显示出具有与ConA结合的糖基侧链，同时证实不是趋化因子受体CCR5。这些实验结果为揭示天花粉蛋白选择性的细胞毒性机制提供了重要的线索。

目录

缩略词表

综述

第一部分天花粉蛋白与核糖体蛋白L10a的结合

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

第二部分天花粉蛋白与人绒毛膜癌细胞膜蛋白的结合

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

致谢

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