深黄被孢霉△—脂肪酸脱氢酶基因探针的制备

摘要

γ—亚麻酸是一种有着极其重要生理作用的不饱和脂肪酸,△<'6>脱氢酶是γ—亚麻酸生物合成的限速酶,因而△<'6>掊氢酶基因的克隆意义重大.而△<'6>脱氢酶基因探针的制备是△<'6>脱氢酶基克隆能否成功的决定性环节.该文根据几个物种的△<'6>脱氢酶共有的三个组氨酸保守区中的Ⅰ、Ⅲ保守区设计了四对PCR引物,对深黄被包霉M<,6-22>株和高山被包霉16266株的△<'6>脱氢酶基因的Ⅰ、Ⅲ区之片段进行了RT-PCR扩增,以便克隆到合适的片段作为深黄被包霉△<'6>脱氢酶基因探针.

目录

摘要

前言

一、γ-亚麻酸(Gamma-Linolenic Acid,GLA)

(一)GLA的生理作用

(二)GLA代谢

(三)自然界含GLA的生物资源

二、△6脱氢酶(Delta6-fatty-acid Desaturase,D6D)

(一)D6D生物化学特性研究

(二)D6D分子生物学研究

(三)主要研究方法

三、本课题理论与现实意义

材料与方法

一、材料

(一)菌株及质粒

(二)培养基

(三)酶及主要试剂

(四)主要仪器

二、实验方法

(一)深黄被孢霉菌体脂肪酸成分气相色谱分析

(二)总RNA提取及完整性与均一性分析

(三)总RNA的RT PCR

(四)PCR产物的纯化

(五)纯化的目的PCR产物连接至克隆载体T-Vector

(六)感受态细胞的制备及转化

(七)转化子质粒的提取及外源片段酶切鉴定

结果与讨论

一、γ-亚麻酸在菌体总脂肪酸中的含量与菌体培养时间的关系

二、总RNA提取

三、总RNA的RT-PCR

四、RT-PCR产物的大量电泳及纯化

五、纯化的RT-PCR产物的克隆及鉴定

六、测序结果分析

七、对策及后续工作

小结

参考文献

致谢