碳硅纤维介导的黄瓜转化体系的建立及培育转基因抗寒黄瓜的初步研究

摘要

该工作以冷敏植物黄瓜为材料,应用PAGE、SDS-PAGE、植物组织培养技术和碳硅纤维(SCW)介导的转化技术,对黄瓜寒胁迫下组织内过氧化物酶(PCD)同工酶、全蛋白进行了研究,并进行了黄瓜转基因受体系统及利用SCW介导的植物愈伤组织基因转移方法培育转基因抗寒黄瓜的研究.POD同工酶对环境因子如低温、盐害及干旱等较酶感.研究人员的工作表明,黄瓜寒胁迫后根、茎、叶的POD同工酶都呈现明显的减弱趋势.但组织全蛋白的变化不尽相同,根和茎的全蛋白微有增加,叶全蛋白有大幅度的增减现象,表现为初步的寒害现象,研究人员以子叶伸出种皮一半时期靠近下胚轴的子叶为外植体,建立了一套黄瓜愈伤组织再生体系和一套黄瓜真接分化再生体系,再生率可达80﹪以上,可作为黄瓜转基因受体系统.SCW介导的黄瓜愈伤组织最适转化体系的研究表明,以黄瓜M<,2>代培养1天的愈伤组织作为受体,外源DNA量为40μg,振荡时间为30分钟的瞬间表达转化效率最高,可高达55﹪以上.SCW介导的抗寒基因p5cs的转化研究表明,转化愈伤组织的游离脯氨酸含量有所提高,PCR鉴定进一步证实了p5cs基因已整合到黄瓜愈伤组织的染色体DNA上并得到组成型的表达.

目录

前言

一.寒害机理

二.抗寒分子机理及抗寒基因工程

(一)导入抗寒功能基因的研究

(二)导入抗寒调控基因的研究

三.植物转基因技术

四.研究意义

材料与方法

一.实验材料

二.实验方法

(二)黄瓜幼苗组织全蛋白的SDS-PAGE分析

(三)黄瓜组织培养方法

(四)质粒的转化、鉴定和提取

(五)碳硅纤维（SCW）介导的植物愈伤组织基因转移的方法

(六)gus基因瞬间表达显色

(七)抗寒基因的导入及其稳定表达的筛选、鉴定

结果与分析

一.黄瓜冷敏感性的鉴定

(一)黄瓜幼苗寒胁迫后的形态变化

(二)黄瓜幼苗寒胁迫后POD同工酶的变化

(三)黄瓜幼苗寒胁迫后蛋白质的变化

二.黄瓜转基因受体系统的建立

(一)黄瓜愈伤组织再生体系的建立

(二)黄瓜直接分化再生体系的建立

三.质粒DNA的酶切鉴定

四.SCW介导的黄瓜愈伤组织的最适转化体系的建立

五.SCW介导的黄瓜愈伤组织p5cs基因的导入及其初步筛选鉴定

(一)黄瓜愈伤组织对抗生素(Km)的抗性浓度的测定

(二)p5cs基因的导入与初期鉴定

讨论

结论

参考文献

致谢