DNA超螺旋对肠产毒性大肠杆菌CFA/I基因表达调节的研究

摘要

产毒性大肠杆菌(ETEC)是引起婴幼儿和旅行者腹泻的主要病原菌,是危害发展中国家的重要病原菌之一.一般认为,ETEC首先依靠其表面定居菌毛,粘附到小肠黏膜上皮细胞,释放肠毒素,引起腹泻.CFA/I菌毛是人致泻性大肠杆菌中发现的第一个与定居有关的菌毛,与其它定居菌毛无论在结构上,还是调节机制上都具有很大的相似性.因此,对CFA/I菌毛基因表达调控的研究对构建安全高效的多价疫苗以及对研究其它肠道菌和非肠道菌的致病机理都有重要意义.通过氯喹啉-琼脂糖凝胶电泳分析,直接证明了top A基因缺陷型宿主菌中的含有CFA/I基因的质粒DNA的负超螺旋水平比相应top A基因野生型宿主菌中的质粒DNA的超螺旋水平要高.研究结果证实,DNA超螺旋水平是CFA/I基因表达的另一调节机制.研究结果发现,由于CFA/I上游基因的突变或重组造成了一株CFA/I基因的高效表达株.

目录

文摘

英文文摘

第一章 前言

一、ETEC和CFA/I菌毛蛋白概况

二、DNA超螺旋水平对基因表达的调控

三、本课题的研究目的、意义和进展

第二章 材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

第三章 结果与分析

一、CFA/I基因重组子到topA-菌株E.coliDM800的转化鉴定

二、CFA/I菌毛基因在受体菌中的表达

三、兔抗CFA/I抗血清中IgG抗体的纯化、浓度测定和特异性检测

四、Anti-CFA/I MAb特异性检测

五、细菌细胞浓度和OD600标准曲线的绘制

六、菌落酶斑免疫检测DNA超螺旋对CFA/I基因的调控

七、CFA/I重组子在宿主菌中的超螺旋水平的测定

八、ELISA包被固相和一抗稀释倍数的优化

第四章 讨论

一、关于实验方法

二、主要实验结果讨论

参考文献

致 谢