马铃薯病毒检测

摘要

该实验室研究突出在简化马铃薯茎和叶片组织的核酸提取方法以及优化RT-PCR一步反应体系(One-tube RT-PCR),从而建立起一套完整而有效的马铃薯病毒检测体系.我们依据上述4种马铃薯病毒的RNA序列保守区域分别设计特异性引物,采用新建立的检测体系对染病的马铃薯茎和叶片组织进行病毒检测,得到与预期一致的特异性病毒扩增片段.将扩增产物进行克隆、测序,结果与GeneBank中报道的病毒序列对应部分的核苷酸序列基本一致,同源性达到96﹪以上,除此以外,我们用此检测体系对病毒核酸进行浓度梯度检测,用DAS-ELISA法设计对照实验.

目录

前言

一.马铃薯病害

二.马铃薯病毒的防治及病毒检测

1.酶联免疫吸附法(ELISA.),

2.核酸斑点杂交技术

3.PCR方法在病毒检测中的广泛应用

4.植物组织RNA提取策略

五.本文研究的目的和意义

材料和方法

一.实验材料

二.试验方法

结果分析

一.提取马铃薯病毒RNA两种方法对比

二.病毒检测结果

三.目的片段的回收、克隆、转化与鉴定

四.测序数据分析

五.检测灵敏度分析

六.马铃薯田间采样病毒检测

七.双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)检测

讨论

小结

参考文献

致谢

附录1:试剂盒中有关试剂与用品