间充质干细胞（MSCs）对神经胶质瘤趋化能力研究

摘要

目的:该实验以立体定向技术建立C6大鼠胶质瘤模型;分离培养并建立稳定增殖的人脐血间充质干细胞(MSCs)株系,利用流式细胞技术鉴定其表面抗原,诱导分化证明其分化潜能;应用免疫组织化学方法观察MSCs对胶质瘤组织的趋化能力及分布规律,为以MSCs为细胞载体的靶向治疗提供实验依据.方法:从健康足月新生儿脐血中分离出间充质干细胞加以培养,以多种抗体标记其表面抗原,用流式细胞仪检测,并行体外诱导分化实验,确定所获细胞是间充质干细胞.借助立体定向仪在大鼠脑组织内定点注射C6大鼠胶质瘤细胞,建立胶质瘤模型.模型建立七天后,再次在立体定向仪的指示下,在模型鼠脑组织中输注预先用BrdU标记的人间充质干细胞.按注入位置分为原位组、同侧半球组和同侧脑室组.六至八天后,处死大鼠,灌注固定后取脑.进一步制作成石蜡切片,以苏木素伊红(H.E.)染色确定胶质瘤组织的范围.相邻切片采用免疫组织化学方法(ABC法)显示标有BrdU的MSCs,观察其在胶质瘤组织和周围正常脑组织中的分布规律.结果:1、大鼠胶质瘤模型成功建立,H.E.染色下胶质瘤组织与周围正常脑组织分界清楚.2、原位组、同侧半球组和同侧脑室组均可见MSCs在胶质瘤组织中广泛分布,而在周围正常脑组织中很少见.特别是在胶质瘤组织与正常组织交界处,这一定向分布更为明显.小结:在大鼠胶质瘤模型中,人间充质干细胞对胶质瘤组织表现出明显趋化性,能从远处向胶质瘤组织迁移并定位于其中.显示MSCs可作为一种潜在的细胞载体用于神经胶质瘤的靶向治疗.上述结果尚未见到国内外相关报道.

目录

摘要

ABSTRACT

1前言

2材料与方法

2.1材料

2.1.1实验动物

2.1.2细胞系

2.1.3主要仪器

2.1.4主要试剂

2.2方法

2.2.1人脐血MSCs制备及性质鉴定

2.2.2 C6大鼠胶质瘤模型的建立

2.2.3 MSCs移植

2.2.4组织处理与切片制作

2.2.5组织切片染色

2.3结果观察

3实验结果

3.1 MSCs形态学观察

3.2 MSCs表面标志鉴定

3.3 MSCs诱导分化结果

3.4大鼠胶质瘤模型的组织学鉴定

3.5 MSCs在胶质瘤组织及周围脑组织中的分布

4讨论

5小结

6参考文献

7致谢

附图

综述神经胶质瘤治疗新策略

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