利用核糖体16S—23S RNA基因间隔区鉴定临床常见的凝固酶阴性葡萄球菌

摘要

葡萄球菌属共包括30多个种，根据是否产生游离的的血．浆凝固酶分为血浆凝固酶阳性(coagulase-positive Staphylococci)和血浆凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococci，CNS)两大群。前者以K期以来一直被认为是人类临床重要致病菌的金黄色葡萄球菌(Staphvlococcus aureus)为代表。很艮时间以来，凝固酶阴性葡萄球菌一直被认为是与临床感染无关的污染菌株。而最近的研究发现凝固酶阴性葡萄球菌已经成为与因外科插管、大量应用抗生素及人体免疫力下降等原因而导致严重的院内交叉感染相关的重要致病菌，也是院内败血症最主要的病原菌且多重耐药的现象严重，如得不到及时控制，其致死率高达18．8～57％。目前已发现的CNS有32种，其中16种从人身体分离出来的。临床感染中最常见的是表皮葡萄球菌，约占分离CNS的70％以上，其次为溶血葡萄球菌和腐生葡萄球菌。 核糖体RNA有生物进化的分子标尺之称，已成为r研究进化的热门遗传单元。利用核糖体16S序列作为分类学工具已在细菌中得到了充分的证明和应用。由于葡萄球菌属内的16S rRNA序列极为保守，因此难以用其对葡萄球菌进行种间分类。在原核生物中，核糖体RNA遗传位点包括了所有三种核糖体RNA的基因，它们分别是：16S、23S和5S rRNA基因。这些基因被一些在属和种水平上显示出高度序列上的和长度上的差异的间隔区域所分隔。国外研究已经证实16S-23S rRNA基因区间的进化率要强于16S rRNA基因10倍，因此显示出更适合区分不同细菌的特点。 本研究采用了16S-23S rDNA内转录间隔区序列PCR(intergenic transcribedspacer PCR，ITS-PCR)技术，对临床分离的人源性凝固酶阴性葡萄球菌进行鉴定。PCR扩增结果经高分辨率琼脂糖凝胶电泳并与标准参照菌株对比后即可直观得出结果。是一种快速，准确的分类鉴定临床常见的人源的葡萄球菌的方法，并且具有高信度和低成本的优点。

目录

文摘

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第一章前言

1.1凝固酶阴性葡萄球菌的研究背景介绍

1.1.1 CNS的微生物学分类

1.1.2感染的现状

1.1.3 CNS的致病机制

1.1.4 CNS的耐药性

1.1.5 MRCNS的检测

1.1.6 CNS流行病学监测新技术

1.1.7 CNS感染的临床特征

1.1.8 CNS感染的治疗

1.2生物核糖体RNA序列在生物分类进化与检测中的应用和研究进展

1.2.1核糖体16S rRNA

1.2.2核糖体23S rRNA

1.2.3核糖体16S-23S rRNA基因间隔序列

1.3 PCR技术与DNA电泳技术

1.3.1 PCR技术简介

1.3.2 DNA电泳技术

1.4研究目标，内容和创新性

1.4.1研究目标

1.4.2研究内容

1.4.3本项工作的创新性

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.1.1菌株

2.1.2引物

2.1.3主要试剂

2.1.4实验所用仪器

2.1.5生物分析软件

2.1.6培养基

2.2实验方法

2.2.1引物的设计

2.2.2葡萄球菌纯培养

2.2.3细菌基因组DNA的提取实验步骤

2.2.4 PCR扩增

2.2.5琼脂糖凝胶电泳

第三章结果与分析

3.1标准株与临床分离株PCR扩增结果3％琼脂糖凝胶电泳电泳分析

3.2不同ITS-PCR实验条件对结果的影响

第四章讨论

4.1葡萄球菌基因组提取方法的摸索

4.2 PCR体系及反应条件的摸索

4.3琼脂糖凝胶电泳的条件摸索

第五章结论

参考文献

致谢

个人简历