异丙肾上腺素诱导心肌细胞表达β-半乳糖苷酶及重要作用

摘要

目的：本实验为了证明心肌细胞是儿茶酚胺诱导产生的β-半乳糖苷酶的一个重要来源，从而为抗炎以及抗心肌纤维化提供新的药物靶点。
　　 方法：用逆转录PCR检测在成年大鼠心室肌细胞，新生鼠心肌成纤维细胞及巨噬细胞系RAW264.7中β-半乳糖苷酶mRNA的表达。用X-gal和鼠β-GALELISA试剂盒检测异丙肾上腺素刺激后的不同细胞，血清和心脏组织匀浆物中β-半乳糖苷酶的表达。用异丙肾上腺素诱导造心肌炎症和心肌纤维化模型。苏木精-伊红染色和天狼星红染色观察组织学变化，同时用X-gal观察组织学β-半乳糖苷酶的表达。
　　 结果：以B淋巴细胞系DT40做阳性对照，用RT-PCR技术在成年大鼠心肌细胞，心肌成纤维细胞以及巨噬细胞系RAW264.7中测得β-半乳糖苷酶mRNA的表达。用异丙肾上腺素处理，大鼠心肌细胞中β-半乳糖苷酶的活性增强，而新生鼠心肌成纤维细胞和巨噬细胞则表达不明显。异丙肾处理后，X-gal染色并未检测到β-半乳糖苷酶的变化。皮下注射异丙肾上腺素成功诱导大鼠体内炎症和纤维化模型，这被HE染色和天狼星红染色分别证实。X-gal染色也证实异丙肾处理的心肌组织中β-半乳糖苷酶的表达，在心肌细胞中明显看到蓝色沉积物。与以上结果一致，异丙肾上腺素处理动物后，其心脏匀浆物和血清中的β-半乳糖苷酶都显著升高。
　　 结论：异丙肾上腺素能诱导动物和分离的心肌细胞的β-半乳糖苷酶表达，但不能诱导其在心肌成纤维细胞和巨噬细胞中的表达。因此异丙肾上腺素不仅可以诱导唾液酸酶的表达，本文证实了它能诱导心肌细胞中β-半乳糖苷酶的表达。因为这两种酶在将Gc蛋白转化为巨噬细胞活化因子过程中发挥重要作用，所以本文的实验结果证实了在一些心脏疾病中唾液酸酶和β-半乳糖苷酶都能作为抗炎和抗纤维化新的药物靶点。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略名词对照表

声明

第一章 前言

1.1 心肌纤维化与心脏重构

1.2 心肌纤维化的发生机制的研究与防治现状

1.3 炎症与心肌纤维化

1.4 巨噬细胞与心血管系统的炎症反应

1.5 巨噬细胞激活因子与巨噬细胞的激活

第二章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物和细胞

2.1.2 试剂

2.1.3 仪器

2.2 实验方法

2.2.1 动物实验

2.2.2 组织切片的HE和天狼星红染色

2.2.3 血清和心脏组织匀浆的β-半乳糖苷酶检测

2.2.4 组织β-半乳糖苷酶染色固定

2.2.5 原代细胞分离

2.2.6 细胞培养

2.2.7 细胞培养基的β-半乳糖苷酶检测

2.2.8 细胞β-半乳糖苷酶固定染色

2.2.9 RT-PCR

第三章 实验结果

3.1 原代心肌细胞和成纤维细胞培养

3.2 β-半乳糖苷酶在心肌细胞、巨噬细胞和成纤维细胞中的表达

3.3 心肌细胞、巨噬细胞、成纤维细胞β-半乳糖苷酶染色

3.4 细胞培养基β-半乳糖苷酶活性检测

3.5 异丙肾上腺素心肌炎症与纤维化模型

3.6 异丙肾上腺素对心肌组织β-半乳糖苷酶的影响

第四章 讨论

4.1 原代细胞分离与培养

4.2 异丙肾上腺素引起心肌纤维化

4.3 异丙肾上腺素引起大鼠体内β-半乳糖苷酶含量升高

4.4 异丙肾上腺素对细胞β-半乳糖苷酶含量的影响

第五章 结论

致谢

参考文献

张万毅简历