高选择性大孔吸附树脂的设计合成及其对贯叶连翘有效成分纯化和分离的研究

摘要

近年来对传统草药贯叶连翘中所含活性组分如金丝桃苷、芦丁、金丝桃素等的药理药效研究,显示了其在抗抑郁、抗肿瘤、抗HIV病毒方面有广泛应用前景。目前对于贯叶连翘中各种活性成分针对不同病症各自的药用机理尚没有完全弄清,同时对于贯叶连翘中不同组分之间的相互作用以及由此引起的用量配比与药效之间的关系尚不明确。因此,分离和纯化贯叶连翘提取物这项工作无论对将来药理的研究还是对其临床效果的有效甄别均很有意义。目前的分离提纯方法存在提取物纯度低、对环境不友好、生产成本过高、工艺复杂、不利于工业化生产等缺点。基于这一现状,本文采用吸附树脂法对贯叶连翘中有效成分进行纯化和分离。
　　 本文首先选用了ADS-17、AB-8和D380C三类商品化树脂对贯叶连翘提取物进行静态吸附解吸实验,考察树脂对贯叶连翘中黄酮和金丝桃素两类有效成分的吸附解吸性能。发现这三类树脂疏水性过强,对金丝桃素吸附能力过强从而导致解吸困难,同时对黄酮和金丝桃素分离效果不佳。
　　 为解决金丝桃素在常见商品化树脂上解吸率过低的问题,合成了一系列交联度不同的MA-co-EGDMA弱极性骨架的吸附树脂。静态吸附解吸实验证明随着树脂骨架疏水性的降低,金丝桃素解吸率明显提高,但黄酮类化合物的吸附容量却随疏水性减弱而大幅降低。为此,我们在现有的弱疏水骨架上引入酰胺基团,利用酰胺基和黄酮分子上的酚羟基间的氢键作用,有效弥补了由于树脂疏水性降低所带来的吸附结合力的降低,明显提高了树脂对黄酮的吸附量。
　　 接下来对酰胺基树脂进行动态梯度吸附解吸实验发现,酰化后的MA-co-EGDMA树脂中,疏水作用强度适宜的E25MNC树脂兼顾了高容量吸附黄酮和高效解吸金丝桃素的分离纯化要求,更重要的是,由于树脂以不同的作用力吸附黄酮和金丝桃素,使得我们在梯度解吸时可将两者分别解吸而达到分离的目的。综合静态和动态吸附、解吸实验的结果,我们选择E25MNC树脂对金丝桃素粗提物进行了分离纯化实验。
　　 最后,本文对E25MNC树脂分离纯化贯叶连翘中黄酮和金丝桃素的操作工艺进行了优化,最终确定最佳操作流程。利用吸附树脂法较好地达到了对贯叶连翘中有效成分黄酮和金丝桃素纯化和分离的目标。纯化后黄酮纯度从3.07％提高到29.74％;金丝桃素由纯化前的0.0924％提高至5.0％。两种组分的收率分别为83.67％和47.79％,纯化和分离的效果比较理想。

目录

文摘

英文文摘

第一章 前言

第一节 中草药有效成分提取分离概况

1.1.1 中草药有效成分提取分离技术综述

1.1.2 吸附树脂在中草药有效成分提取分离中的应用

第二节 吸附树脂简介

1.2.1 吸附作用

1.2.2 吸附树脂的分类及性能

1.2.3 吸附树脂的合成

1.2.4 高选择性树脂的调控方法

第三节 课题的提出

1.3.1 贯叶连翘Hypericum Perforatum主要成分

1.3.2 贯叶连翘Hypericum Perforatum活性组分的药用价值

1.3.3 目前已报导的分离和提纯贯叶连翘中有效成分的方法

第二章 高选择性大孔吸附树脂的设计合成及性能表征

第一节 实验部分

2.1.1 试剂与仪器

2.1.2 树脂的合成

2.1.3 树脂的性能表征

第二节 结果与讨论

2.2.1 树脂的制备

2.2.2 胺基含量讨论

2.2.3 不同酰化方案对于酰化效果的影响

2.2.4 红外光谱测定讨论

第三节 本章结论

第三章 树脂的吸附机理及其结构调控规律的建立

第一节 实验部分

3.1.1 试剂与仪器

3.1.2 HPLC分析方法的建立

3.1.3 静态吸附和解吸实验

3.1.3 动态吸附和解吸实验

第二节 结果与讨论

3.2.1 HPLC分析方法的确定

3.2.2 静态吸附解吸结果讨论

3.2.3 动态吸附解吸结果讨论

第三节 本章结论

第四章 贯叶连翘粗提物中金丝桃素和黄酮分离工艺的建立

第一节 实验部分

4.1.1 试剂与仪器

4.1.2 上柱液浓度的影响

4.1.3 吸附流速的影响

4.1.4 最佳洗脱工艺的确定

第二节 结果与讨论

4.2.1 上柱液浓度对吸附性能的影响

4.2.2 上柱液吸附流速对吸附性能的影响

4.2.3 最佳洗脱工艺的确定

第三节 本章结论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

个人简历