胰腺癌血清学诊断方法的探索及围手术期术前术后的比较分析

摘要

背景：由于胰腺的解剖位置关系以及缺乏特异有效的检查手段，胰腺癌的早期诊断仍相当困难，几乎所有已有症状患者确诊时都已处于晚期。胰腺癌是恶性程度极高的肿瘤，其5年生存率只有4.6％，少部分可行手术切除的胰头癌患者的5年生存率也只有26％。胰腺癌与慢性胰腺炎的临床症状很相似，二者难以区分。近几年来，也出现了首发症状为急性胰腺炎的胰腺癌病例报道。因此，临床医生在对胰腺疾病病人进行诊断时，将胰腺良性疾病与胰腺癌区分开来变得尤为重要。
　　 目的：胰腺癌发病率在国内外呈逐年上升趋势，早期诊断相当困难，确诊时几乎均为中晚期。本研究目的在于用统计学、生物信息学和MALDI-TOF MS寻找早期鉴别诊断胰腺良恶性疾病及胰腺癌转移分化情况的生物标记物。
　　 方法：实验一：用统计学分析胰腺良性和恶性疾病常规血清生化参数。回顾性分析我院2009-2010年肝胆外科住院患者病案，建立研究对象的纳入和排除标准，用SPSS分析各组生化参数的差异。实验二：用MB-WCX提取血清蛋白，并进行质谱分析。研究对象为根据病理诊断的胰腺癌患者和相关良性疾病患者，建立两组的鉴别诊断模型，寻找差异峰，预测蛋白。实验三：血清进行前处理后，采用双抗体夹心流式荧光免疫检测法，在Luminex多功能流式点阵分析仪上进行检测，用SPSS软件分析各组细胞因子的差异。
　　 结果：1.胰腺良性疾病组与胰腺癌组有12项生化指标有显著性差异；二元logistic回归结果表明CA199、LDH、CO2、AMY联合诊断良恶性疾病ROC曲线下面积为0.966，诊断准确度达到93.3％；CO2、GLU和CA153可建立CP和PC鉴别诊断模型，其ROC面积达到0.985；CY211、SCC、LDL三项指标联合在胰腺癌淋巴结阴性与阳性鉴别中ROC面积达到0.907，准确度达到82.1％，特异度达到96％；对23例围手术期患者进行分析，17项生化指标有统计学意义，其中与术前相比，术后CA125、SA、CRP显著升高，TP、ALB、CR、UA、CK、CA、MG、NA、CL、AMY、LPS、SOD、IMA显著降低；可进行手术切除术与不可进行手术根治术治疗的癌症患者之间有8项生化指标有显著性差异。2.用血清肽质量指纹图谱建立胰腺良恶性疾病的鉴别诊断模型。获11个差异峰，用二元logistic分析，分子量为4170.54和8132.77m/z的蛋白联合诊断胰腺癌ROC面积达到0.856。3.胰腺相关良性疾病与胰腺癌组比较，有差异的指标为IL-1β、IL-2；与良性疾病组相比，胰腺癌组MCP-1下降，而GM-CSF升高，对每组的MCP-1/GM-CSF进行分析比较，其差异很显著，p<0.01，MCP-1/GM-CSF提高了MCP-1，GM-CSF独自诊断良恶性疾病的诊断性能；细胞因子对良恶性疾病的诊断性能不太好，但是可以作为胰腺癌筛查的较好的指标，ROC达到0.917；以CA199分层，CA199≥500ng/ml组TNF、IFN-γ显著低于CA199<500ng/ml组；GM-CSF与IL-1β相关性最高，达到0.854。
　　 结论：生物信息学工具和质谱技术为胰腺癌良恶性疾病的研究提供了有前景的策略，CA199，LDH，CO2，AMY联合诊断在胰腺良恶性疾病的鉴别诊断上具有重要意义。虽然细胞因子对胰腺良恶性疾病的鉴别诊断性能不如生化指标好，但可作为鉴别疾病组和正常组较好的指标。