5株副溶血弧菌O血清型决定簇的破译及特异基因的鉴定

摘要

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）是一种嗜盐的革兰氏阴性细菌，广泛分布在海洋环境中。它主要存在于鱼类、贝类等海产品中，是一种引起食源性疾病的重要病原，可导致患者患上胃肠炎、创伤感染和败血症。
　　 副溶血弧菌分为13个O血清型和71个K血清型。对于副溶血弧菌，目前有两株不同血清型的菌株(O3:K6和O4:K8)完成了全基因组测序，通过生物信息学分析，同时运用PCR-RFLP分析证明该菌的O血清型决定簇位于持家基因coaD和gmhD之间。目前对副溶血弧菌O血清型决定簇的了解还很少，本论文完成了该菌O1、O5、O7、O10和O12这五种血清型O血清型决定簇的测序和分析。首先通过位于持家基因coaD和gmhD内引物对该基因簇进行Long-PCR扩增，然后运用鸟枪法将所得到PCR产物构建基因文库，筛选阳性克隆进行序列测定，在获得完整序列的基础上，进行生物信息学分析，预测基因功能，并筛选基因簇中的特异基因。
　　 对这五株副溶血弧菌的O血清型决定簇分析后，我们发现：coaD基因和gmhD基因之间的基因，多数转录方向为5’→3’，个别基因由3’→5’方向转录；O血清型决定簇的（G+C）含量在40％-45%之间，相对其他细菌的基因组而言，其(G+C)含量并无太大区别。O血清型决定簇中含有常见的单糖合成酶基因和糖基转移酶基因；但是没有典型寡糖单位处理酶基因。这也许与其细胞壁的结构有关。副溶血弧菌的细胞壁与其他革兰氏阴性细菌的细胞壁不同，其细胞壁并不具有完整的脂多糖，它的O特异侧链(O抗原)可能被其细胞壁上的核心寡糖所代替，所以它的O血清型决定簇中没有O抗原合成所必须的寡糖单位处理酶基因。