绿色小胶质细胞标记的转基因斑马鱼的构建

摘要

小胶质细胞(microglia)是中枢神经系统(central nervous system，CNS)中固有的免疫细胞，同时在视网膜中起维持神经元内稳态和免疫防御的作用。越来越多的实验数据表明，小胶质细胞的慢性激活与多种神经退行性疾病有关，如阿尔茨海默病、帕金森病和多发性硬化等。在视网膜退行性疾病中，内源性的刺激使小胶质细胞迅速活化，产生一系列反应，如细胞增殖，向损伤部位迁移以及具备更高的吞噬活性，小胶质细胞还分泌多种细胞因子、趋化因子和神经毒性因子，行使神经保护和神经毒性双重作用。
　　 近年来，斑马鱼作为新型动物模型已经在发育生物学和基因功能研究领域得到了广泛应用。由于斑马鱼的中枢神经系统具有强大的自我修复能力，尤其是视网膜等神经组织具有再生能力，斑马鱼成为人类神经系统疾病研究的理想动物模型。
　　 本研究中，我们首先克隆斑马鱼小胶质细胞特异性表达基因progranulin-α的启动子(～2.2kb)，将该启动子序列克隆到To12转座子EGFP基因的上游，构建转座载体pgrna-nfsB-EGFP，最后将转座载体和体外转录的转座酶通过显微注射的方式注射入1-4细胞期野生型斑马鱼胚胎中；将F0中阳性成体鱼与野生型斑马鱼交配，利用荧光显微镜筛选F1代阳性个体，通过整体原位杂交以及免疫组化方法进行鉴定，成功构建出稳定遗传的转基因斑马鱼品系Tg(pgrna：nfsB：：EGFP)，为研究小胶质细胞在神经系统相关的疾病中的作用提供了重要的研究工具。