大孔树脂的合成及其作为固相合成载体的应用

摘要

固相合成技术已经广泛地应用于合成生物大分子，比如多肽和寡核苷酸。其中一个关键因素是选择合适的聚合物载体，虽然近些年开发了多种固相载体，但是这些载体有其自身的缺点，没有一种载体能够达到固相合成所有的要求。大孔树脂作为固相合成的载体有其自身的优点，与传统的凝胶型树脂相比有多孔性结构和较高的交联度，这些不同使大孔树脂有高的比表面积，高的机械强度，与多种溶剂有较好的相容性。更重要的是，使用不溶胀的大孔树脂作为固相载体可以有效地减少反应体积和溶剂的消耗量，这无疑会提高反应效率，并且降低成本。
　　 本文选择丙烯酸甲酯和丙烯腈为单体，二乙烯基苯为交联剂，利用悬浮聚合方法合成出大孔的聚丙烯酸甲酯树脂和聚丙烯腈树脂。然后此树脂与乙二胺反应，得到表面含氨基的聚丙烯酸甲酯树脂和聚丙烯腈树脂，通过调节反应时间和反应温度，可以有效地调控负载量，本文中负载量在100-500μmol/g之间。此树脂与连接臂(linker)4-[(2，4-二甲氧基苯基)(Fmoc-氨基)甲基]苯氧乙酸反应后，通过Fmoc固相多肽合成方法合成出了困难肽ACP(65-74)，利用液质联用仪和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪证明了合成出ACP(65-74)，利用高效液相色谱仪得到ACP(65-74)的纯度，证明了这两类树脂可以作为多肽固相合成的载体。
　　 与此同时，利用上述树脂合成出寡核苷酸(序列为5'-CCC TGT GCT TTGCTT CCT GT-3')。在进行固相合成时，所用的连接臂为5'-O-(4，4'-二甲氧基三苯基甲基)-胸苷-3-O-丁二酸。利用DNA自动合成仪合成出的寡核苷酸产率和纯度能够达到60％左右，此类树脂可能成为制备大量核酸药物的重要载体。

目录

声明

摘要

第一章 引言

第一节 多肽固相合成概述

1．1．1 多肽固相合成的发展历程

1．1．2 多肽固相合成的基本原理

1．1．3 用于多肽固相合成的载体

1．1．4 多肽固相合成法存在的问题

第二节 寡核苷酸固相合成简述

1．2．1 寡核苷酸固相合成的基本原理

1．2．2 用于寡核苷酸固相合成的载体

第三节 本课题的提出和主要研究内容

第二章 聚丙烯腈(PAN)树脂和聚丙烯酸甲酯(PMA)树脂的制备及功能基化

第一节 实验部分

2．1．1 主要实验试剂和仪器

2．1．2 试剂预处理

2．1．3 PAN树脂的制备及功能基化

2．1．4 PMA树脂的制备及功能基化

第二节 实验结果与讨论

2．2．1 PAN树脂的制备及功能基化

2．2．2 PMA树脂的制备及功能基化

第三节 本章小结

第三章 PAN树脂和PMA树脂在固相合成中的应用

第一节 实验部分

3．1．1 主要实验试剂和仪器

3．1．2 试剂与仪器预处理

3．1．3 在PAN和PMA树脂上合成ACP(65-74)

3．1．4 在PAN和PMA树脂上合成寡核苷酸

第二节 结果与讨论

3．2．1 在PAN和PMA树脂上合成ACP(65-74)

3．2．2 在PAN和PMA树脂上合成寡核苷酸

第三节 本章小结

全文总结

参考文献

致谢

作者简介及研究成果