左西孟旦对家兔心衰模型心房肌细胞钙稳态及电生理特性的影响

摘要

背景:慢性心力衰竭是各种心血管疾病发展的终末阶段，目前针对心力衰竭的治疗中正性肌力药物是重要的环节，然而传统的正性肌力药物的药理作用都是以增加细胞内钙离子浓度为途径增强细胞收缩力，可能会造成细胞内钙调控蛋白表达异常，引起细胞钙超载以及心律失常的发生，左西孟旦作为钙离子增敏剂，是一种新型正性肌力药物，目前对其临床应用的安全性以及长期预后的报道存在较大差异，本研究旨在探讨左西孟旦对心房肌细胞钙稳态及电生理活动的影响。
　　目的:用静脉滴注异丙肾上腺素制备心衰模型，模型制备成功后给与左西孟旦(levosimendan)观察对心房肌细胞钙稳态以及电生理指标影响。
　　方法:将18只家兔随机分为心衰模型组（ISO，12只）及对照组(ctrl，6只)心衰模型组每间隔7天静脉滴注异丙肾上腺素，7周后超声心动图评价所有实验动物心脏结构和功能，确定心衰模型制备成功后，将心衰组动物分为左西孟旦干预组（ISO+lev，6只）及注射等量生理盐水组（ISO+NS，6只），三组动物分别行电生理指标检查，测量有效不应期，房颤诱发率，房颤持续时间，频率适应性。急性分离部分心房细胞，荧光染料Fluo-3负载细胞，流式细胞仪检测荧光强度，代表静息状态下细胞钙浓度，收集剩余心房组织，蛋白质印迹法分别测定三组细胞钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)、兰尼碱受体2型(RyP2)、肌浆网钙ATP酶α(SERCAα)、L型钙通道a1亚基蛋白(Cav1.2)。
　　结果:(1)7周后ISO组射血分数较对照组显著下降（48.0±3.2％ vs.69.4±3.3％ p＜0.01）。ISO+NS组心房肌细胞与对照组相比舒张末钙离子平均荧光强度明显上升（31.25±2.1 vs.24.52±3.4 p＜0.01），有效不应期上升（AERP200为117.8±8.3 ms vs.94.5±6.1 msp＜0.05，AERP150为108.0±9.1 ms vs.85.7±5.0 ms p＜0.01），房颤诱发率上升(33％ vs.0％p＜0.01) CaMKⅡδ表达含量明显上升、RyR2、SERCAα、Cav1.2表达明显下降(P＜0.05)。(2) ISO+lev组与ISO+NS组相比，舒张末钙离子荧光强度亦见明显差异（33.5±3.6 vs.31.2±2.1 p＞0.05），CaMKⅡδ、RyR2、SERCAα、Cav1.2蛋白表达含量亦未见明显差异。有效不应期缩短（AERP200为102.83±9.6ms vs.117.8±8.3 ms p＜0.05,AERP150为95.2±8.5 ms vs.108±9.1 ms p＜0.05），房颤诱发率(50％ vs.33％，p＞0.05)未见明显统计学差异，总体房颤持续时间延长(585 s vs.321 s)。
　　结论:(1)应用异丙肾上腺素建立心衰模型符合心力衰竭的心脏功能及血流动力学改变。并且造成心肌肥厚及心室扩大。(2)心力衰竭导致了心肌细胞钙超载钙稳态破坏，增加房颤发生的可能性。(3)应用左西孟旦治疗心力衰竭并不造成舒张末细胞钙浓度及钙稳态的异常，但有效不应期的缩短，可能成为房颤发生的潜在危险因素。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 试剂

2．1．3 所需溶液配置

2．1．4 主要实验仪器

2．2 方法

2．2．1 动物模型制备

2．2．2 电生理指标测量

2．2．3 心房肌舒张末钙浓度测定

2．2．4 蛋白免疫印记(Western Blot)检测心肌钙相关调控蛋白表达

2．2．5 结果处理

第三章 实验结果

3．1 异丙肾上腺素制备心衰模型

3．1．1 动物状态

3．1．2 动物模型心功能指标

3．2 心房肌细胞钙浓度

3．3 三组实验动物相关钙调控蛋白免疫印记比较

3．3．1 SERCA2a蛋白表达含量的测定

3．3．2 RyR2蛋白表达含量的测定

3．3．3 CaMKⅡ蛋白表达含量测定

3．3．4 L-型钙通道蛋白CaV1．2蛋白表达含量测定

3．4 电生理指标检查结果

3．4．1 三组实验动物AERP200与AERP150的比较

3．4．2 三组实验动物房颤诱发率比较

第四章 讨论

4．1 异丙肾上腺素建立心衰模型的机制

4．2 心衰与心肌钙稳态的关系

4．3 钙离子增敏剂左西孟旦对细胞内钙浓度及钙调控蛋白的影响

4．4 钙离子增敏剂对心房细胞有效不应期，房颤诱发率的影响

第五章 结论

参考文献

致谢

附录 文献综述 钙增敏剂对心肌钙稳态的影响

个人简历