HPSEC-MALS法检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗分子大小分布的方法建立、验证及稳定性跟踪

摘要

脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis)引起的流行性脑膜炎(简称流脑)是在全球范围内侵染儿童的主要传染病之一。国际频繁交往使流行菌群的地域间传播不可避免，因此通过接种流脑疫苗来预防流行性脑膜炎成为控制该类疾病发生和传播的重要手段。常见的流脑疫苗包括多糖疫苗和多糖-蛋白结合疫苗或结合疫苗，多糖与蛋白结合后形成的抗原是T细胞依赖性抗原，为全抗原，其诱导的免疫应答有T淋巴细胞参与，能产生免疫记忆。
　　根据其荚膜多糖性质的不同，脑膜炎球菌可分为13个血清群，其中A，B，C，W和Y五个群为主要流行群。因此，针对A，C，W和Y的多糖疫苗或多糖-蛋白结合疫苗是重要的流脑疫苗产品。分子大小分布与这类疫苗的免疫原性和保护性有着重要的相关性，是评价产品质量和稳定性的主要参数。由于传统的检测方法都非常繁琐且时间很长，因此需要一种新能快速简便的测定ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的分子大小分布的方法。
　　本论文在传统的光散射技术基础上，将高效液相色谱-体积排阻色谱-示差检测-多角度激光光散射(HPLC-SEC-RI-MALS)联用，经过对HPSEC-MALS法方法的建立和验证，最终确立了一种检测ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的分子大小分布的新方法。该方法在不需要标准样品的情况下，能快速准确地测定出四价流脑结合疫苗的分子大小等，而且准确性和重现性很好。
　　对ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗结合原液进行一系列破坏性处理后，运用HPSEC-MALS法观察其强力破坏后原液中的主要成分分子量大小的变化趋势，我们验证了该方法能准确分析ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的降解情况，证明了HPSEC-MALS法可用于样品稳定性的研究。
　　最后，本论文应用HPSEC-MALS法对四个不同批次的四价流脑结合疫苗结合原液进行分子大小分布的测定，并研究了其分子构象图。结果表明，HPSEC-MALS法对于测量疫苗产品分子大小分布以及稳定性跟踪有良好的适用性，是一种可以替代药典中传统检测方法的高效的检测方式。

目录

声明

摘要

第一章 综述

第一节 流行性脑膜炎概述

1．1．1 脑膜炎奈瑟菌(Nm)

1．1．2 脑膜炎球菌的危害性及流行趋势

第二节 脑膜炎球菌疫苗

1．2．1 脑膜炎球菌多糖疫苗

1．2．2 脑膜炎球菌多糖结合疫苗

第三节 高聚物分子量检测方法

1．3．1 光散射法

1．3．2 光散射技术应用于大分子表征

第四节 本文研究的目的、内容及主要意义

第二章 HPSEC-MALS法检测ACYW135群结合疫苗分子量大小检测方法的建立

第一节 引言

第二节 材料与方法

2．2．1 实验主要仪器

2．2．2 实验所用溶剂

2．2．3 实验方法

第三节 结果与分析

2．3．1 检测结果与存在问题

2．3．2 色谱条件的优化

第四节 结论

第三章 HPSEC-MALS法检测ACYW135群结合疫苗分子量大小检测方法的验证

第一节 概述

第二节 方法验证

3．2．1 dn／dc值的测定

3．2．2 A、C、Y、W135结合原液方法验证

第三节 验证结果与分析

3．3．1 A、C、Y、W135结合原液重复性验证结果

3．3．2 A、C、Y、W135结合原液日间精密度验证结果

第四节 结论

第四章 ACYW135群结合疫苗稳定性预实验

第一节 概述

第二节 稳定性预实验方案

4．2．1 实验材料

4．2．2 高温破坏实验

4．2．3 冻融实验

第三节 稳定性预实验结果与分析

4．3．1 高温强力破坏实验结果

4．3．2 冻融强力破坏实验结果

第四节 结论

第五章 HPSEC-MALS法的应用

第一节 HPSEC-MALS法的应用

5．1．1 检测材料

5．1．2 检测结果

第二节 HPSEC-MALS法的展望

参考文献

致谢

个人简历