峨参内酯联合5-FU抗结肠癌作用研究

摘要

目的：探讨峨参内酯对人结肠癌细胞HCT116细胞体外的抗肿瘤活性及其作用机制;探讨峨参内酯对CT26小鼠移植瘤的体内抗肿瘤活性;探讨峨参内酯对HT29裸鼠移植瘤的体内抗肿瘤活性。
　　方法：⑴采用CCK法检测峨参内酯对HCT116结肠癌平面细胞以及HCT116结肠癌多细胞球模型的抑制作用，并探讨高、中、低剂量峨参内酯联合氟尿嘧啶对HCT116多细胞球模型的抑制作用；⑵采用Western Blot检测峨参内酯联合氟尿嘧啶对结肠癌HCT116多细胞球模型FAK以及iNOS的表达；⑶采用鼠源结肠癌细胞CT26建立Balb/c小鼠移植瘤模型，造模后随机将小鼠分为5组，分别为峨参内酯组、5-FU组、5-FU+峨参内酯组作为药物治疗组，模型组及空白组给予0.5％CMC-NA以及生理盐水作为对照。治疗结束后，观察小鼠的一般状态、胸腺指数、脾脏指数、药物的抑瘤率，通过ELISA初步检测各组小鼠血清中COX2、iNOS和NF-KB的表达情况；⑷采用人源结肠癌细胞HT29建立Balb/c裸鼠移植瘤模型，造模后随机将裸鼠分为7组，分别为峨参内酯中剂量组、5-FU组、5-FU+峨参内酯高（中、低）剂量组作为药物治疗组，模型组及空白组给予0.5％CMC-NA以及生理盐水作为对照。治疗结束后，观察小鼠的一般状态、脾脏指数、药物的抑瘤率。
　　结论：①峨参内酯对结肠癌细胞HCT116二维细胞、三维多细胞球具有抑制作用，二维细胞IC50=15.290μg/ml，三维多细胞球IC50=23.455μg/ml，且作用呈一定的剂量依赖性；②联合运用峨参内酯、5-FU，能够显著提高其对HCT116三维多细胞球的抑制作用，随着峨参内酯浓度的增高，其对HCT116多细胞球的抑制作用显著升高，与峨参内酯的浓度呈一定的剂量依赖性；③峨参内酯联合5-FU能够显著抑制HCT116细胞FAK蛋白与iNOS蛋白的表达；④峨参内酯对Balb/c小鼠CT26结肠癌皮下移植瘤具有一定的抑制作用，抑瘤率为18.81％，单独应用化疗药物5-FU的抑瘤率为76.60％,联合应用峨参内酯和5-FU的抑瘤率为89.44％。峨参内酯与5-FU联用起到了减毒增效的作用；⑤峨参内酯能够提高实验小鼠的胸腺指数和脾脏指数，降低实验小鼠血清中COX2、iNOS、NF-κB的浓度；⑥峨参内酯对Balb/c裸鼠人结肠癌细胞HT-29皮下移植瘤具有一定的抑制作用，抑瘤率为21.86％，单独应用化疗药物5-FU的抑瘤率为33.63％，联合应用5-FU和峨参内酯高、中、低剂量组的抑瘤率分别为50.53％、42.18％、35.21％。峨参内酯与5-FU联用起到了减毒增效的作用，且在一定程度上与峨参内酯的浓度有关；⑦峨参内酯能够通过提高裸鼠的脾脏指数来发挥抗肿瘤的作用。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 峨参概述

1．1．1 植物形态学特征

1．1．2 化学成分研究

1．1．3 药理作用研究

1．1．4 峨参内酯的研究

1．2 结直肠癌研究

1．2．1 结直肠癌概述

1．2．2 结直肠癌的病因

1．2．3 结直肠癌的治疗

1．3 5-FU的研究概况

1．3．1 5-FU抗肿瘤作用机制

1．3．2 5-FU的耐药机制

1．3．3 基于5-FU的新药开发

1．3．4 5-FU化疗治疗结肠癌

1．4 课题研究背景

1．4．1 课题研究意义

1．4．2 课题来源

第二章 峨参内酯联合氟尿嘧啶对HCT116多细胞球模型的影响及机制研究

2．1 实验材料

2．1．1 实验药物及细胞

2．1．2 主要仪器与试剂

2．2 实验方法

2．2．1 细胞复苏及传代培养

2．2．2 人结肠癌HCT116细胞三维多细胞球模型培养

2．2．3 CCK8法检测峨参内酯对HCT116细胞增殖的影响

2．2．4 CCK8法检测峨参内酯对HCT116三维多细胞球增殖的影响

2．2．5 CCK8法检测峨参内酯联合5-FU对HCT116三维多细胞球增殖的影响

2．2．6 Western Blot测定人结肠癌HCT116细胞FAK，iNOS蛋白表达

2．2．7 统计学分析

2．3 结果

2．3．1 峨参内酯对HCT116细胞增殖的影响

2．3．2 峨参内酯对HCT116三维多细胞球增殖的影响

2．3．3 峨参内酯联合5-FU对HCT116三维多细胞球增殖的影响

2．3．4 Western Blot测定峨参内酯联合5-FU对人结肠癌HCT116细胞FAK，iNOS蛋白表达的影响

2．4 讨论

2．5 本章小结

第三章 峨参内酯对CT26结肠癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

3．1 小鼠移植瘤模型的建立方法

3．1．1 腹水瘤移植接种法

3．1．2 实体瘤移植接种法

3．2 实验材料

3．2．1 细胞株

3．2．2 实验动物

3．2．3 主要仪器

3．3 实验药物与试剂

3．3．1 实验药物

3．3．2 实验主要试剂

3．4 实验方法

3．4．1 结肠癌小鼠移植瘤模型建立

3．4．2 小鼠的给药方案

3．5 检测指标与具体方法

3．5．1 一般行为状态观察

3．5．2 小鼠体重变化

3．5．3 小鼠肿瘤体积变化

3．5．4 计算抑瘤率

3．5．5 胸腺指数和脾指数测定

3．5．6 ELISA试剂盒检测小鼠血清中COX2、iNOS、NF-κB的表达

3．6 统计学处理

3．7 实验结果

3．7．1 一般行为状态比较

3．7．2 小鼠体重变化

3．7．3 小鼠肿瘤体积变化

3．7．4 各实验组对小鼠抑瘤率的影响

3．7．5 各实验组对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响

3．7．6 小鼠血清中COX2、iNOS、NF-κB的表达分析

3．8 讨论

3．9 本章小结

第四章 峨参内酯对裸鼠人结肠癌细胞皮下移植瘤生长的影响

4．1 实验材料

4．1．1 细胞株

4．1．2 实验动物

4．1．3 主要仪器

4．2 实验药物与试剂

4．2．1 实验药物

4．2．2 实验主要试剂

4．3 实验方法

4．3．1 裸鼠人结肠癌皮下移植瘤模型建立

4．3．2 裸小鼠的给药方案

4．4 检测指标与具体方法

4．4．1 一般行为状态观察

4．4．2 裸鼠体重变化

4．4．3 裸鼠肿瘤体积变化

4．4．4 计算抑瘤率

4．4．5 脾脏指数测定

4．5 统计学处理

4．6 实验结果

4．6．1 一般行为状态观察

4．6．2 裸鼠体重变化

4．6．3 裸鼠肿瘤体积变化

4．6．4 各药物组对裸鼠人结肠癌HT29皮下移植瘤抑瘤率的影响

4．6．5 各药物组对裸鼠脾脏指数的影响

4．7 讨论

4．8 本章小结

结论

致谢

参考文献

硕士期间发表论文