异源精子人工诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体的细胞学研究

摘要

本文采用遗传失活的太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)精子诱导栉孔扇贝(Chlamys fareri)雌核发育二倍体。采用荧光显微观察、组织切片技术、染色体滴片技术、压片技术和基因组荧光原位杂交(GISH)技术等手段，对栉孔扇贝雌核发育二倍体进行细胞遗传学研究，并对紫外线失活精子和染色体加倍的适宜参数进行筛选。主要研究内容分为以下三部分： 一、栉孔扇贝♀×太平洋牡蛎♂受精和早期胚胎发育过程的细胞学观察 采用荧光显微观察和组织切片技术，对栉孔扇贝♀×太平洋牡蛎♂受精和第一、二次卵裂过程中核相变化进行观察与分析，运用压片法和热滴片法分别对4-8细胞期胚胎和担轮幼虫进行染色体制片，并对染色体数目进行统计分析。实验结果表明，荧光显微观察与组织切片观察结果相同，太平洋牡蛎精子可以进入栉孔扇贝卵子，并激活卵子使其释放第一极体(PB1)和第二极体(PB2)；雌、雄原核形成后融合为合子核；受精卵开始第一次卵裂；杂交胚胎发育过程中，囊胚期延长、胚胎畸形严重，担轮幼虫期出现大量死亡，未检测到成活的D形幼虫；杂交胚胎染色体数目变化范围较大，在20-85之间，受精过程中存在多精入卵及染色体多极分离现象。 二、异精栉孔扇贝雌核发育二倍体诱导参数的筛选 1.太平洋牡蛎精子遗传失活 太平洋牡蛎精子经照射强度为1500μw/cm<'2>的紫外线遗传失活，与栉孔扇贝卵子受精，照射时间从0s到120s间隔10s设置梯度，诱导栉孔扇贝雌核发育单倍体，设太平洋牡蛎卵子为对照组；通过滴片法和压片法制备染色体以检测单倍体率；统计受精率和早期胚胎存活率以确定最佳照射时间。结果表明，1500μw/cm<'2>的紫外线照射太平洋牡蛎60s是获得栉孔扇贝雌核发育单倍体的适宜条件。随着照射时间的增加，受精率明显下降，早期胚胎存活率存在

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章海洋经济贝类雌核发育的研究进展

第一节扇贝杂交育种和贝类雌核发育的研究历史及现状

第二节天然雌核发育的机制与人工雌核发育的诱导原理及方法

第三节诱导雌核发育二倍体受精过程的观察及倍性的鉴定方法

第四节贝类雌核发育二倍体的生物学特性

第五节雌核发育在贝类遗传育种中的意义和应用

第六节贝类雌核发育存在的问题及前景展望

第二章栉孔扇贝♀×太平洋牡蛎♂受精和早期胚胎发育过程的细胞学研究

0引言

1材料与方法

2结果

3讨论与结论

第三章异精栉孔扇贝雌核发育二倍体诱导参数的筛选

第一节对太平洋牡蛎精子遗传失活的研究

0引言

1材料与方法

2结果

3讨论

第二节异精栉孔扇贝雌核发育二倍体诱导参数的筛选

0引言

1材料与方法

2结果

3讨论

第四章异精诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体受精过程的细胞学观察及雌核二倍体的检测

第一节异精诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体早期胚胎的荧光显微观察

0引言

1材料与方法

2结果

3 讨 论

第二节异精诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体早期胚胎的切片观察及雌核二倍体的检测

0引言

1材料与方法

2结果

3 讨论

总结

参考文献

附录

致谢