用gusA和celB基因检测慢生花生根瘤菌竞争性的可行性研究

摘要

该试验采用大肠杆菌和根瘤菌接合的方法,将gusA和celB两种标记基因分别导入了三株慢生型花生根瘤菌Spr3-5,Spr3-7和Spr4-5中,检测结果表明,gusA和celB基因在三株慢生型花生根瘤菌Spr3-5,Spr3-7和Spr4-5中可以有效表达.利用标记基因进行生态学研究,首先要考虑到标记基因对受体菌的影响,对出发菌株和标记菌株的代时测定结果表明,二者之间没有显著差异,说明导入标记基因的菌株其生长速率没有发生改变.通过水培试验研究了标记基因对受体菌株的竞争结瘤能力和固氮有效性的影响.在标记菌株与出发菌株等量接种的前提下,比较了二者的竞争结瘤能力,结果显示,标记菌株形成的根瘤(蓝瘤)的占瘤率与50﹪相比差异不显著,说明标记菌的竞争结瘤能力与出发菌株相比没有发生显著改变.为了研究标记菌株与出发菌株的固氮有效性,测定了标记菌株与出发菌株各自共生植株的干重、全氮和叶绿素含量.通过盆载试验研究了标记菌与土著菌的竞争结瘤试验,结果表明该试验所采用的三个菌株与土著菌相比有更高的竞争结瘤能力,其固氮有效性也较高.同时证明利用gusA和celB基因研究根瘤菌的竞争结瘤能力是简单可行的方法,可以较为直观的对标记菌形成的根瘤进行检测.当然,从检测所需费用来看,celB基因标记法成本更低一些.

目录

1.前言

1.1根瘤菌标记技术

1.2选题目的和意义

2.材料与方法

2.1材料

2.1.1标记供试菌株

2.1.2水培试验材料

2.1.3盆栽试验材料

2.1.5培养基

2.2方法

2.2.1菌株的标记步骤

2.2.2标记菌株与出发菌株的代时测定

2.2.3水培试验方法

2.2.4盆栽试验内容与方法

2.2.5 gusA和celB占瘤率检测方法

2.2.6植物样品分析方法

3结果与分析

3.1标记基因活性检测

3.2标记菌株与出发菌株代时分析

3.3水培试验结果分析

3.3.1标记菌株与出发菌株竞争结瘤能力分析

3.3.2标记菌株与出发菌株固氮有效性分析

3.4盆栽试验结果分析

4.讨论

5 结论

参考文献

致谢