一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定、毒力及病毒蛋白的研究

摘要

本文对来自临床的疑似猪繁殖与呼吸综合征的猪肺脏病料进行病毒分离，在Marc-145细胞上分离得到一株病毒，定名为PP03。经传代后，细胞病变出现稳定，以细胞圆缩、聚集、脱落为特征。该病毒接种Vero、PK15细胞并盲传三代均不出现细胞病变。 通过电镜观察可以看出该病毒粒子呈球形，有囊膜，大小为65-70nm左右，在细胞中分布于细胞浆。通过免疫电镜可以看到病毒与抗体形成的抗原抗体复合物。在理化试验中，该病毒56℃30 min被灭活，对酸度变化较为敏感，在PH6.5-7.2环境中病毒毒力稳定。该病毒TCID<,50>为10<'-3.62>/ml，在传代细胞上毒力中等，通过血清中和试验最终证明PP03是一株PRRSV病毒。 在动物试验中，PP03很好的复制出了猪繁殖与呼吸综合征临床症状。PP03试验猪表现出典型的呼吸症状，剖解可以看出其肺脏出现典型的间质性肺炎病变。采集发病猪血清作ELISA抗体检测，可以观察到抗体效价在接种后的变化规律，接种后10～20 d抗体水平出现急剧升高和降低，30 d后趋于平稳并在其后一段时间内维持在一个较高的水平。从发病猪肺脏再次成功分离得到一致的病毒。参考毒株ZM接种猪未表现任何明显临床症状，剖解后肺脏亦无明显病理变化。通过ELISA抗体检测发现，在接种ZM后10～24 d抗体呈现温和的上升趋势，接种后28 d达到较高水平后趋于平稳。在对ZM接种猪的肺脏进行病毒分离后亦得到相同的病毒。 通过SDS-PAGE蛋白电泳，分析了PP03的病毒蛋白，并与参考毒株ZM、SH进行了比较。结果发现在分子量38.7KD、21.9KD、17.1KD以及16.0KD处，三株病毒形成了共同条带。在32.3KD和28.6KD处，PP03和ZM两种毒株的蛋白条带有微小差异，分析可能由不同毒株病毒蛋白成分糖基化的差异造成。经Western-blotting发现，分子量约38.7KD、31.OKD以及17.1KD的蛋白条带能与阳性抗体形成杂交条带，因而是不同毒株的共同抗原成分。

目录

文摘

英文文摘

声明

1.前言

1.1 PRRS的病原学

1.2 PRRSV流行病学和免疫学

1.3 PRRSV的研究热点及进展

2.目的和意义

3.材料与方法

3.1试验材料

3.2试验方法

4.试验结果

4.1病毒的分离培养

4.2病毒的电镜观察

4.3毒力试验和中和试验

4.4病毒理化试验

4.5动物回归试验

4.6血清学实验

4.7 SDS-PAGE与免疫印迹

5.讨论

5.1病毒的分离和初步纯化

5.2病毒的电镜观察

5.3病毒的毒力差异和理化性质

5.4毒株的致病性与血清学试验

5.5 SDS-PAGE与Western-Blotting

6.结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的文章