声明
摘要
第一部分文献综述
1植物转基因技术
2油菜转基因技术
2.1基因工程在油菜中的应用
2.2油菜转基因存在的问题
3农杆菌介导floral-dip转基因技术
3.1农杆菌介导floral-dip法的提出及发展
3.2农杆菌介导floral-dip法的优点
4转基因后代的遗传、表达与沉默
4.1转基因后代的遗传
4.2转基因后代的表达
4.3转基因的沉默
5转基因后代的检测
5.1选择标记基因与报告基因
5.2 PCR检测
5.3 Southern杂交
6拟南芥CRY1基因的结构及功能
6.1拟南芥CRY1基因的结构
6.2拟南芥CRY1基因的功能
7本研究的目的与意义
7.1本研究的目的
7.2本研究的意义
第二部分材料与方法
1材料
1.1油菜材料
1.2菌株及目的基因
1.3主要生化试剂
1.4培养基配方
1.5主要仪器设备
2方法
2.1转基因甘蓝型油菜T2代的Km抗性鉴定
2.2转基因植株的PCR检测
2.3目的片段的回收、克隆测序和序列比对
2.4 GUS报告基因的组织化学活性检测
2.5转化植株的花色素苷提取
2.6转基因油菜品质变异检测
2.7 Km抗性筛选方法的比较
第三部分结果分析
1 Km最佳致死浓度的确定
2转基因T2代Km抗性分离结果
3转基因植株的PCR检测及序列比对
3.1引物设计与合成结果
3.2 PCR反应体系及条件优化
3.4目的条带回收、克隆测序及序列对比
4 GUS组织化学检测
5花色素苷积累量的比较
6转基因油菜T3代种子主要品质性状的分析
7 Km筛选方法的比较
7.1叶片涂抹法
7.2种子浸泡法
7.3 MS培养基筛选法
第四部分讨论
1拟南芥CRY1基因导入甘蓝型油菜后的遗传方式及表达
1.1拟南芥CRY1基因导入甘蓝型油菜的遗传方式
1.2拟南芥CRY1导入甘蓝型油菜的表达
2转基因油菜的分子检测
3转基因油菜T3代与非转基因油菜品质的比较
4 不同卡那霉素抗性筛选方法的比较
4.1叶片涂抹法
4.2种子浸泡法
4.3 MS培养基法
参考文献
致谢
研究生期间发表的文章