苦瓜花药培养诱导愈伤组织及器官分化的研究

摘要

近年来由花粉花药培养产生了单倍体育种技术，大多数作物都开展了相关的离体花粉花药培养研究。在茄科、禾本科、十字花科植物上其研究和开发有了长足的进展。而在瓜类蔬菜作物上，研究较少，尤其是苦瓜花药培养至今未见有报道。本试验以雅安本地农户种植的大白苦瓜为材料，系统地研究了苦瓜花药培养的技术体系。初步探讨了苦瓜花药培养过程中花蕾的最佳取材时期，小孢子发育处于单核期时的花蕾外观形态，最佳愈伤组织诱导培养基及不定根分化培养基，并对不定根进行染色体观察，确定其倍性。试验结果如下： 1、花蕾的取材时期：以大白苦瓜为材料的花药培养，最佳取材时期为5～7月的上午9～10点，天气以阴天为宜。 2、小孢子发育处于单核时期的花蕾外观形态：未开花花蕾，花蕾长为8,5～10mm；横径为4～5mm；花萼微张开，花瓣露出部分<2mm；花瓣颜色绿色到淡绿色，可以微黄，但不能呈较多的黄色：花药颜色为淡黄色～黄绿色，花丝与花药比小于1/2。 3、本试验采用16个激素组合，结合MS、N6、B5三种基本培养基，以及分别为3％和5％浓度的蔗糖、麦芽糖对苦瓜花药进行愈伤组织诱导。得到的最佳诱导培养基为：MS+BA 0,5mg/L+NAA 0,2 mg/L+2,4-D 0,5 mg/L+KT 2,0 mg/L+蔗糖3％+琼脂0,8％。 4、在22个花药器官分化培养基中，只有MS+KT 1,0mg/L+2,4-D 0,5mg/L+蔗糖3％+琼脂0,8％分化出了不定根。分化出不定根的愈伤组织呈白色松散状。 5、细胞分裂素BA、KT在整个花药培养过程中必不可少，在配合使用NAA时能使花药愈伤组织得到很好的增殖。 6、分化出的不定根染色体计数为2n=3x=33，为三倍体。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

1前言

2文献综述

2.1苦瓜离体培养主要研究概况

2.2瓜类花药组织培养研究进展

2.2.1基因型的影响

2.2.2小孢子发育时期的影响

2.2.3材料发育时期生长环境的影响

2.2.4基本培养基

2.2.5碳源

2.2.6激素

2.2.7活性炭

2.2.8预处理

2.2.9培养温度和光照

3目的及意义

4试验材料与方法

4.1试验材料

4.2试验方法

4.2.1苦瓜花药培养取材时期的确立

4.2.2苦瓜花药愈伤组织的诱导

4.2.3不同激素处理对苦瓜花药愈伤组织器官分化的影响

4.2.4倍性鉴定

4.2.5数据统计分析方法

5结果与分析

5.1苦瓜花药取材的时期

5.2小孢子发育处于单核期时与外部形态的相关

5.3不同激素组合对诱导苦瓜花药愈伤组织的影响

5.4不同基本培养基对花药愈伤组织诱导的影响

5.5不同碳源及其浓度对花药愈伤组织诱导的影响

5.6不同激素组合对苦瓜花药愈伤组织器官分化的影响

5.6.1 BA、KT、NAA、IAA对苦瓜花药愈伤组织不定芽分化的影响

5.6.2植物生长调节剂对苦瓜花药愈伤分化不定芽的影响

5.6.3 BA、KT、2,4-D对花药愈伤组织器官分化的影响

5.6.4多次继代调节其内源激素对苦瓜花药愈伤器官分化的影响

5.7分化器官的倍性

6讨论

6.1小孢子的发育时期

6.2植物生长调节剂

6.2.1在花药愈伤组织诱导过程中的作用

6.2.2在花药器官分化过程的作用

6.3基本培养基

6.3.1 MS

6.3.2 N6

6.3.3 B5

6.4碳源

6.5愈伤组织的分化

6.6组织培养过程中染色体数目的变异

7小结

8对下一步研究的思考

8.1苦瓜花药愈伤组织不定芽分化途径

8.2胚性愈伤组织诱导途径

8.3小孢子培养

参考文献

致谢

附图

攻读硕士学位期间发表的学术论文