青刺果总黄酮的提取工艺及其对糖尿病小鼠降血糖效应的研究

摘要

糖尿病(DiabetesMellitus，DM)是一种严重危害人民健康的慢性疾病，以高血糖代谢为特征，持续高血糖带来氧化应激增加，引起各种慢性并发症。已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后的重大流行病之一。因此寻找治疗糖尿病新药，特别是寻找对糖尿病引起的并发症有显著疗效的天然药物，已成为防治糖尿病的当务之急。其中，天然黄酮类化合物独特的药理方式和良好的疗效，已成为降血糖新药开发和研究的热点之一。 青刺果(PrinsepiaUtilisRoyle)为蔷薇科扁核木属植物总花扁核的果实，文献报道青刺果油具有辅助降血脂和降血糖作用，而未见青刺果中黄酮成分的降血糖作用报道。为了给防治糖尿病寻找新的黄酮资源，本研究对青刺果总黄酮(TotalflavonoidsfromPrinsepiautilisRoyle，FPR)的提取工艺、定性鉴定和含量测定方法进行了探讨，以便得到青刺果总黄酮最佳的提取工艺；为了探讨其降血糖作用，进行了动物降血糖试验，观察了其对糖尿病小鼠的血糖(BloodGlucose，GLU)、总胆固醇(TotalCholesterol，TC)；甘油三酯(triglyceride，TG)；极低密度脂蛋白(VeryLowDensityLipoproteinVholesterol，VLDL-C)，谷丙氨酸氨基转移酶(AlanineAminotransferase，ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AspartateAminotransferase，AST)和尿素氮(BloodUreaNitrogen，BUN)等指标的影响;通过观察其对糖尿病小鼠心、肝、肺、肾脏器组织的保护作用，初步探讨了其对糖尿病所致并发症的疗效。主要研究结果如下： 1.研究青刺果总黄酮的提取工艺和含量。本研究运用有机溶剂萃取法、碱溶酸沉法及结晶法探讨了青刺果总黄酮的提取工艺，并以芦丁为对照品，采用颜色反应和薄层层析对青刺果总黄酮进行理化鉴别，用紫外分光光度法测定含量。结果表明与有机溶剂萃取法、碱溶酸沉法比较，以结晶法制备青刺果总黄酮效果较好，总黄酮含量为33.6％。 2.本试验采取腹腔注射四氧嘧啶-Alloxan,ALX(200mg/kg)建立糖尿病小鼠模型，造模成功后，将糖尿病模型小鼠随机分为：模型对照组(Diabetesmellitusgroup，DM)组(不治疗组)，阿卡波糖治疗组(Acarbosegroup，AR)组(20mg/kg)(阳性药物治疗组)，青刺果总黄酮治疗组(TotalflavonoidsfromPrinsepiautilisRoylegroup，FPR)组(300mg/kg)，同时另设一个正常组(Normalcontrolgroup，NC组)，治疗组每天灌胃给药一次,模型对照组和正常组每天灌胃生理盐水一次。于试验后第2周和第4周末空腹采血测GLU，TC，TG，VLDL-C，ALT，AST和BUN等指标。结果表明：与模型对照组相比：青刺果总黄酮能极显著降低GLU，TG和AST水平(P＜0.01)，能显著降低VLDL-C，ALT和BUN水平(P＜0.05)。 3.为探讨青刺果总黄酮对糖尿病小鼠所致并发症的疗效，本研究于试验的第2周和4周末，处死部分小鼠，取心、肝、肺、肾，部分组织用于制作石蜡切片，HE(HematoxylinandEosin)或Gomori或PAS(PeriodicacidSchiff)染色，光镜观察其变化；4周末的部分肾组织用于制作超薄切片，电镜观察其变化。结果如下：与模型对照组相比，青刺果总黄酮治疗组各器官的病理变化都相对较轻，具体表现为：光镜下，心肌纤维纵横纹较清楚，心肌纤维嗜酸性变减轻；肝脏指数显著降低，肝细胞索状结构清楚，肝细胞呈轻微的颗粒变性；肺泡腔增大，肺泡壁基本恢复正常，肺间质、支气管周围有少量的网状纤维和胶原纤维，肺出血得到缓解；肾脏指数极显著降低(P＜0.01)，肾小球体积较小，系膜细胞相对减少，肾小球基底膜无明显增厚，间质少量炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞基本恢复正常，肾小管内糖原沉积减少，肾小管间质网状纤维和胶原纤维含量减少。电镜下，肾小管上皮细胞线粒体基本恢复正常，足细胞突起排列整齐。由此可见，青刺果总黄酮能减轻糖尿病小鼠心肌、肝脏、肺脏和肾脏的病理变化，对糖尿病小鼠心、肝、肺、肾具有保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

第一部分 文献综述和选题背景

第一章黄酮类物质抗糖尿病及其并发症的作用机制

1概述

2胰岛素的生物学作用及黄酮刺激β细胞分泌胰岛素或类胰岛素作用

3糖尿病中的氧化损伤与黄酮的抗氧化作用

4非酶糖基化终末产物的有害性及黄酮抗蛋白质非酶糖基化作用

5 α-葡萄糖苷酶抑制剂治疗糖尿病的作用及黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

第二章选题背景和试验研究的目的与意义

第二部分试验研究

第一章青刺果总黄酮的提取、鉴定及含量测定

1材料

2方法

3结果

4讨论

第二章青刺果总黄酮纯化工艺的选择

1.材料

2方法

3结果

4讨论

第三章青刺果总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的降糖作用

1材料

2方法

3结果

4讨论

第四章青刺果总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠心、肝、肺、肾组织病理变化的影响

1材料

2方法

3结果

4讨论

第三部分结论

参考文献

版图及说明1

版图及说明2

致谢

攻读硕士期间发表论文情况