新型长效促红细胞生成素（LL-rHuEPO）的临床前药代动力学研究

摘要

促红细胞生成素(EPO)是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白，能与表达于红细胞表面的EPO受体结合，刺激骨髓中红系造血母细胞的增殖和分化。近年来研究显示，EPO是具有多种活性的生长因子，EPO-RmRNA，EPO-R蛋白，EPO与EPO·R结合广泛存在于大脑，心血管组织，肝脏，胃肠道组织，胰岛等非红细胞生成细胞与器官。自从1989年美国正式批准基因工程药rHuEPO进入市场以来，重组人促红细胞生成素(rHuEPO)已广泛用于临床，治疗各种类型的贫血病。但市场上的各种rHuEPO药物的生物半衰期短(4-8小时)，临床使用注射次数多。目前新制剂的发展方向为拉长其半衰期，主要着眼于氨基酸的置换或者氨基酸的修改，增加糖链或者两个独立的EPO片段的连接，这样就延长了rHuEPO生物半衰期，患者由每周两三次注射改变为每周一次或者两周一次，大大减轻了患者的痛苦。由国内研究机构研制的新型长效促红细胞生成素(LL-rHuEPO)，目前正拟申报此类新药。研究该药物在大鼠体内的药代动力学规律，阐明药代动力学特点，提供重要的药代动力学参数，为过渡到临床研究提供必要的依据。本研究采用125I同位素示踪法研究LL-rHuEPO不同给药途径及不同给药剂量下在大鼠体内的药代动力学、组织分布以及排泄规律，所得结果如下： 1.(1)LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学研究：单次静脉注射1，2，3ug/kg125I-LL-rHuEPO后，通过统计矩的方法计算所得的主要药代动力学参数是：血药浓度一时间曲线下面积(AUC(0-48h))分别为：192.137，329.434，641.622(ug/L/h)；Cmax分别为：12.1，18.874，29.398(ug/L)。AUC、Cmax与剂量呈线性关系。消除半衰期t1/2z分别为：20.457h，25.053h，20.409h。(2)单次肌肉注射1，2，3ug/kg125I-LL-rHuEPO后，通过统计矩的方法计算所得的主要药代动力学参数是：清除率CLz/F从0.001到0.006L/h/kg；消除半衰期t1/2z从25.258h到287.91h，但多数维持在40-60之间：药物在体内的平均驻留时间MRT(0-t)基本一致，范围从33.664h到34.883h:Cmax与AUC(0-72h)表现与剂量呈明显的线性关系。 2.LL-rHuEPO在大鼠体内的组织分布：SD大鼠经肌肉注射2ug/kg125I-LL-rHuEPO，测定不同时间不同组织的药物浓度。给药后8h、24h、48h，LL-rHuEPO主要分布在注射部肌肉，血浆，骨髓中，骨髓是其主要作用部位。血流量大的组织：心、肾、肝等次之，脑、小肠、大肠等分布最少。 3.LL-rHuEPO在大鼠体内的排泄：SD大鼠静脉注射2ug/kg125I-LL-rHuEPO后11天内，粪、尿的总排泄量为22.09％，其中尿累积量占20.7％，而粪只占1.39％。 结论：1.大鼠静脉注射1，2，3ug/kgLL-rHuEPO后，消除半衰期20-25h之间。2.大鼠肌肉注射1，2，3ug/kg的LL-rHuEPO后，消除半衰期30-60h之间。3.LL-rHuEPO的消除半衰期明显长于rHuEPO。4.LL-rHuEPO肌肉注射生物利用度较高(约81％)。5.大鼠肌肉注射2ug/kg的LL-rHuEPO后组织分布广泛，骨髓是其主要作用部位。6.LL-rHuEPO主要经肾由尿排泄，在体内经受广泛的代谢转化为代谢物而消除。

目录

文摘

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引言

1药代动力学概述

1.1蛋白多肽类药物动力学

1.2药动学模型

1.3药动学中的应用统计软件

2 EPO的研究进展

2.1 EPO的研究历程

2.2 EPO的生理功能

2.3促红细胞生成素的特性

2.4促红细胞生成素的分类

3本研究的目的和意义

材料与方法

1试验材料

1.1药品与试剂

1.2试验仪器

1.3试验动物

2试验方法

2.1 125I-LL-rHuEPO生物活性鉴定

2.2血浆药物浓度-时间曲线试验

2.3组织分布试验

2.4排泄试验

2.5数据处理

试验结果

1 125I-LL-rHuEPO生物活性鉴定

2 125I-LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学

2.1 125I-LI-rHuEPO在大鼠体内的血药浓度

2.2 125I-LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学参数

3 124I-LL-rHuEPO在大鼠体内分布

4 125I-LL-rHuEPO在大鼠粪、尿中的排泄

讨论

1药物浓度的检测方法

1.1检测方法的选择

1.2同位素的选择

1.3125I作为示踪剂检测血药浓度方法的建立

1.4同位素标记物生物活性鉴定方法的选择

2药代动力学参数分析

3分布

4排泄

结论

参考文献

致谢

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