谷氨酰胺对鲤鱼肠上皮细胞抗氧化能力的影响

摘要

本试验以原代培养鲤鱼肠上皮细胞为研究模型，研究了谷氨酰胺（Gln）对鲤鱼肠上皮细胞抗氧化能力的影响。研究共包括2个试验：试验一、体外培养鲤鱼IEC氧化应激模型的建立；试验二在试验一的基础上，应用已建立的肠上皮细胞氧化应激模型研究了Gln对氧化应激状态下IEC抗氧化能力的影响。 试验一在原代培养的IEC培养基中分别添加0、15、30、45、60和100μM/L的过氧化氢（H2O2）溶液。结果表明：当H2O2浓度高于15μM/L时，对原代培养鲤鱼肠上皮细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）活力有极显著（P<0．01）影响；当H2O2浓度高于45μ/L时，对原代培养鲤鱼肠上皮细胞培养液丙二醛（MDA）含量有极显著（P<0．01）影响；且过氧化氢浓度与LDH活性和MDA含量呈极显著的正相关（r1=+0．840，P<0．01；r2=+0．763，P<0．01）。 试验二共设6个处理：处理一，空白对照组，采用无血清培养基常规培养，不加处理因素；处理二，过氧化氢组，无血清培养基加入浓度为100μM/L过氧化氢；处理三至六，Gln处理组，含浓度分别为4、8、12和20 mmol/LGln无血清培养基并加入终浓度为100μM/L，过氧化氢。结果表明：鲤鱼肠上皮细胞用100μM/LH2O2处理后，细胞培养液中的LDH活性、MDA含量和细胞内蛋白羰基含量均极显著（P<0．01）高于空白对照组；添加不同浓度的Gln能极显著（P<0．01）降低培养液中的LDH活性、MDA含量和细胞内蛋白羰基含量，表明Gln能保护IEC细胞膜完整性，减少脂质和蛋白质氧化。鲤鱼肠上皮细胞用100μM/LH2O2处理后，碱性磷酸酶活性、钠钾ATP酶活性、γ-谷氨酰转移酶活性均极显著（P<0．01）低于空白对照组；添加不同浓度的Gln能极显著（P<0．01）提高碱性磷酸酶、钠钾ATP酶和γ-谷氨酰转移酶活性，表明Gln能抑制肠细胞功能受损。鲤鱼肠上皮细胞用100μM/LH2O2处理后，鲤鱼肠上皮细胞的抗超氧阴离子活力、抗羟自由基活力极显著降低（P<0．01）；一氧化氮含量极显著升高（P<0．01）；添加不同浓度的Gln能极显著（P<0．01）提高细胞抗超氧阴离子活力、抗羟自由基活力，降低一氧化氮的含量。表明Gln能够提高细胞清除自由基的能力。鲤鱼肠上皮细胞用100μM/LH2O2处理后，超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、谷胱甘肽过氧化酶活性、谷胱甘肽还原酶活性、谷胱甘肽S-转移酶活性、还原型谷胱甘肽含量和还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽的比值极显著降低（P<0．01）；添加不同浓度的Gln能极显著（P<0．01）提高超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、谷胱甘肽过氧化酶活性、谷胱甘肽还原酶活性、谷胱甘肽S-转移酶活性、还原型谷胱甘肽含量和还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽的比值（P<0．01），表明Gln能够提高IEC抗氧化能力。 结果说明：当过氧化氢含量为15-100μM/L时都能诱导鲤鱼肠上皮细胞发生氧化损伤。谷氨酰胺维护了鲤鱼肠上皮细胞结构的完整性，保持了细胞正常的分化能力和吸收功能。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

1.前言

2.文献综述

2.1 水生动物的氧化和抗氧化系统

2.2 Gln对肠道抗氧化能力的影响

2.3 Gln提高肠道抗氧化能力的可能作用方式

2.4存在的问题

3.本实验的目的及意义

4.材料与方法

5.结果

6.讨论

6.1 鲤鱼IEC氧化应激模型建立

6.2 Gln对H2O2 损伤鲤鱼IEC保护作用

6.2.1 Gln对氧化损伤时IEC膜结构的影响

6.2.2 Gln对氧化损伤时IEC功能的影响

6.2.3 Gln维持细胞结构和功能的可能原因

6.3 Gln对建鲤IEC清除自由基能力的影响

6.4.Gln增强IEC清除自由基能力的途径

6.4.1 Gln能增强抗氧化酶的活性

6.4.2 Gln能增加细胞内GSH的含量

7.结论

参考文献

致谢

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