黄鳝体表溃疡病病原菌的分离、鉴定和组织病理学观察

摘要

黄鳝是中国地区特有的温水性名贵经济鱼类，其市场价值和开发潜力巨大。近年来，在四川、湖北等地出现了一种严重危害黄鳝养殖的传染性疾病，其主要症状为：腹部皮肤发白溃疡，周围组织呈黑色，重者溃疡烂穿露出骨骼和内脏，伴有红肿出现。该病具有传染快、死亡率高等特点，给养殖业带来了巨大经济损失。本文通过细菌分离鉴定和分子生物学等方法首次鉴定了四川地区黄鳝体表溃疡病的病原菌，并进行了相关的药敏试验和人工感染黄鳝的组织病理学观察。 从患体表溃疡病的黄鳝的肝、肠和肾中分离到致病菌株（hs-1），分离菌株通过肌肉注射、划痕浸泡等方式对黄鳝进行人工感染试验，出现了与自然病例相似的症状，证实该菌为黄鳝体表溃疡病的病原菌。分离菌对鲤鱼和泥鳅同样具有致病性。分离菌株在TSA平板上生长，菌落呈圆形、边缘整齐、中央微隆起、半透明或灰白色、光滑、湿润。该菌的生理生化特性为：革兰氏阴性短杆菌、单极生鞭毛、无芽孢、两端钝圆、单个或两个相连排列；有运动性，能利用葡萄糖产气，氧化酶、甘露糖、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、麦芽糖、明胶和V-P为阳性：七叶灵、水杨苷、H2S为阴性。以该菌株的16S rDNA序列（GenBank编号为FJ461353）在RDP数据库进行在线Classifer，结果表明：该菌属于气单胞菌属。再将获得的序列与GenBank中已报道的的4株温和气单胞菌和6株嗜水气单胞菌的16S rDNA序列用DNAstar软件进行多序列比对分析和构建系统发育树，结果证实：该菌株与其他温和气单胞菌形成一个簇群，同源性高达98．3％。根据形态学、生理生化特性，并结合同源性分析结果，鉴定该分离菌为温和气单胞菌（Aeromonas sobria）。 分离菌株对21种药物的药敏试验结果表明：该病原菌对头孢氨噻肟、头孢曲松钠、丙氟哌酸、洛美沙星、氟哌酸、壮观霉素、萘啶酸、四环素、磺胺异噁唑、甲氧苄啶、头孢他啶等11种药物高度敏感；对头孢氨苄、利福平、链霉素、卡那霉素、红霉素、呋喃妥因、头孢拉啶等7种药物中度敏感；对氨苄青霉素、乙酰螺旋霉素、新生霉素等3种药物不敏感。 对黄鳝人工感染分离菌株后的临床症状和病理变化进行了观察。感染黄鳝出现与自然发病黄鳝相似的体表溃疡症状，感染后12-36h为死亡高峰期。感染后9h开始出现明显的临床症状，黄鳝头肿大，腹部出现红斑块，肛门红肿外翻；感染后12h，腹部出现明显溃疡斑，身体扭转，开始出现死亡；感染后18h，黄鳝头部出血，腹部出现大小不等的溃疡斑、红肿，肛门红肿外翻。病理组织学变化以肝细胞变性；肠绒毛脱落，黏膜肌上有大量红细胞；肾小球结构消失，充满大量红细胞为主。感染后9-27h出现肝细胞索排列紊乱，肝细胞肿大并空泡化，部分肝细胞破裂；感染后3-30h小肠绒毛脱落，固有层淋巴小结增生，粘膜下层、肌层、浆膜层红细胞增多；感染后3-21h肾小管上皮细胞肿胀，严重颗粒变性，肾小球上皮细胞坏死，细胞核淡然，消失；感染后21-30h肌纤维细胞坏死，大量炎性细胞浸润。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分 文献综述

1.黄鳝生物学特性研究进展

1.1 生长

1.2 营养需要

1.3 人工养殖和繁殖技术

1.4 黄鳝的性逆转

2.黄鳝疾病及其防治研究进展

2.1 出血病

2.2 肠炎病

2.3体表溃疡病

2.4 细菌性烂尾病

2.5 感冒病

2.6 隐藏新棘虫病

2.7 毛细线虫

3.温和气单胞菌研究进展

3.1 生物学特性

3.2 致病性

3.3 致病因子研究

3.4 检测技术

3.5 免疫现状及主要防治方法

试验目的与意义

第二部分 研究报告

1.材料

1.1 实验动物

1.2 主要试剂及配制方法

1.3 主要仪器

2 试验方法

2.1 发病情况

2.2 病原菌的分离培养

2.3 分离菌株致病性试验

2.4 病原菌的鉴定

2.5 药物敏感性试验

2.6 病理学观察

3.实验结果

3.1 发病情况

3.2 病原菌的形态特征

3.3 病原菌的致病性

3.4 病原菌的鉴定

3.5 药物感性试验

3.6 病理学观察

4 讨 论

4.1 病原菌的鉴定

4.2 病原菌的致病性

4.3 病因分析

4.4 药物敏感性

4.5 黄鳝疾病的控制

4.6 病理变化

5 结论

参考文献

致谢

附图