马郁兰离体微繁技术研究

摘要

本研究以唇形科芳香植物马郁兰为材料，通过对灭菌时间、外源激素种类和炼苗移栽环境的筛选，观察马郁兰在初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽阶段的生长状况，研究了马郁兰继代培养过程中内源激素（IAA、ZRs、iPAs）和酶活性（POD、PAL、蛋白酶）的变化特征，建立了一套快速、高效、稳定的马郁兰快速繁殖技术，试验结果如下：
　　 (1)灭菌时间筛选
　　 0.10％升汞灭菌时间为6min时效果最好，污染率为仅为5.76％，褐化率为4.17％。
　　 (2)初代培养基筛选
　　 初代培养基筛选中，不定芽分裂数和不定芽生长状况作为观察指标，以生长素IBA浓度为0.05mg/L筛选细胞分裂素(6-BA、TDZ、6-BA+KT)种类和浓度，结果表明：细胞分裂素以6-BA最佳，浓度为3.00mg/L时不定芽分裂数达到5.00,并且叶色正常呈灰绿色，节距短。以6-BA浓度为3.00mg/L筛选生长素(IBA、NAA、2，4-D、IBA+NAA)种类和浓度，结果表明：生长素以IBA诱导不定芽效果最好，当浓度为0.10mg/L时不定芽分裂数可达5.55，叶呈灰绿色，节距长。
　　 (3)继代培养基筛选
　　 继代培养基的选择根据初代培养基不定芽分裂数和生长状况，以6-BA作为细胞分裂素，浓度为3.00mg/L，选择IBA作为生长素，结果表明：当IBA浓度为0.10mg/L时，不定芽分裂数较其他处理多，可达5.55，叶色正常呈灰绿色。
　　 (4)生根培养基筛选
　　 对马郁兰生根培养研究表明：以1/2MS培养基为基本培养基，NAA浓度为0.10mg/L时生根率可达97.62％，根系粗壮，根长较长。
　　 (5)炼苗移栽阶段不同基质和遮光度筛选
　　 对不同基质和遮光度研究表明：在遮光度为95％，珍珠岩：蛭石的比例为1：2的条件下存活率可达92.86％。
　　 (6)马郁兰离体微繁技术流程
　　 最佳0.10％升汞灭菌时间为6min，最适初代培养基和继代培养基以6-BA3.00mg/L+IBA0.10mg/L的MS培养基，生根培养基为添加0.10mg/LNAA的1/2MS培养基，移栽炼苗阶段以遮光度95％条件下，珍珠岩：蛭石的比例1:2时存活率最高。
　　 (7)继代培养过程中内源激素研究
　　 通过对继代培养过程中IAA、iPAs和ZRs三种内源激素的研究，结果表明：IBA浓度为0.05、0.10、0.15mg/L三个处理，三种内源激素的变化趋势是一致的，即呈先增加后减少的趋势，IAA和iPAs在7d的时候达到峰值，ZRs在14d达到峰值，而IBA为0.00mg/L的处理变化趋势与其余三个处理不一致。
　　 (8)继代培养过程中酶活性研究
　　 通过对继代培养过程中过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)和蛋白酶的研究，结果表明：IBA浓度为0.05mg/L和0.10mg/L两个处理POD和PAL都呈先增加后较少的趋势，在14d达到峰值，其余两个处理变化趋势不一致。蛋白酶活性的变化，IBA浓度为0.00mg/L和0.10mg/L两个处理都呈先下降后升高趋势，其余两个处理变化趋势不一致。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略符号与中英文对照表

1 文献综述

1.1 马郁兰生物学特性及其研究状况

1.1.1 生物学特性

1.1.2 马郁兰研究状况

1.1.3 马郁兰应用状况

1.2 唇形科植物离体微繁技术研究状况

1.2.1 唇形科药用植物离体微繁技术研究状况

1.2.2 唇形科芳香类植物离体微繁技术的研究状况

1.2.3 次生代谢方面的研究

1.2.4 品种改良方面的研究

1.3 离体微繁技术关键影响因子的研究

1.3.1 外植体的影响

1.3.2 外源激素的影响

1.3.3 矿质元素及其他有机成分的影响

1.4 植物离体培养中酶活性研究

2 研究目的与意义

3 试验方法与内容

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.3 材料处理

3.4 材料的培养

3.4.1 初代培养

3.4.2 继代培养

3.4.3 生根培养

3.4.4 炼苗与移栽

3.5 取样方法

3.6 生理生化指标及测定方法

3.6.1 激素测定

3.6.2 酶活性测定

3.7 观察指标

3.7.1 污染率的统计

3.7.2 生根率统计

3.7.3 存活率统计

3.8 数据统计分析

4 结果与分析

4.1 灭菌时间对污染和褐化的影响

4.2 培养基中细胞分裂素不同种类和浓度对马郁兰芽分化的影响

4.3 培养基中生长素不同种类和浓度对马郁兰芽分化的影响

4.4 继代培养基筛选

4.5 生根培养基筛选

4.6 不同基质和遮光度对马郁兰成活率的影响

4.7 继代培养中内源激素变化

4.7.1 内源激素IAA含量变化

4.7.2 内源激素iPAs含量变化

4.7.3 内源激素ZRs含量变化

4.7.4 内源激素IAA/iPAs含量变化

4.7.5 内源激素IAA/ZRs含量变化

4.8 继代培养中酶活性变化

4.8.1 过氧化物酶(POD)活性变化

4.8.2 苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性变化

4.8.3 蛋白酶活性变化

5 讨论

5.1 灭菌时间与污染和褐化的关系

5.2 外源激素对马郁兰芽分化的影响

5.2.1 细胞分裂素对马郁兰芽分化的影响

5.2.2 生长素对马郁兰芽分化的影响

5.3 不同培养基对马郁兰不定根形成的影响

5.4 不同基质和遮光度对马郁兰成活率的影响

5.5 继代培养过程中内源激素的变化

5.6 酶活性变化对马郁兰芽分化的影响

5.6.1 过氧化物酶(POD)对马郁兰芽分化的影响

5.6.2 苯丙氨酸裂解酶(PAL)对马郁兰芽分化的影响

5.6.3 蛋白酶活性对马郁兰芽分化的影响

5.7 马郁兰离体微繁技术流程、微繁系数及其理论值

5.7.1 马郁兰离体微繁技术流程

5.7.2 微繁系数及其理论值

6 结论与存在的问题

6.1 结论

6.2 存在的问题

参考文献

致谢

附图