内生放线菌S-42的鉴定及对黄瓜枯萎病拮抗效果研究

摘要

黄瓜枯萎病是黄瓜生产中普遍发生的病害，尤其在温室大棚内危害更为严重，给黄瓜的生产带来了巨大的经济损失。植物内生放线菌是一种丰富的微生物资源，能产生有生物活性的次级代谢产物，在植物病害的生物防治中有重要意义。本论文针对黄瓜枯萎病在蔬菜生产中的危害，从多种药用植物内生放线菌中筛选对黄瓜枯萎病有生防潜力的拮抗菌株。
　　 (1)通过皿内对峙试验，从80株内生放线菌中筛选出对病原真菌有拮抗作用的菌株11株。菌株S-42是测试菌株中拮抗作用最强的一株药用植物内生内生放线菌。
　　 (2)通过抑菌谱的测定发现菌株S-42不仅对多种常见植物病原菌有较强的抑制作用，还对3种常见的细菌（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌），酵母菌有较强的抑制作用。具有很好的生防潜力。
　　 (3)发酵条件初探表明，菌株S-42的最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为酵母膏，Fe2+不利于菌株产生抗菌物质，最佳发酵时间为6天，最佳发酵PH为7.0。
　　 (4)盆栽试验中，使用菌株S-42发现该菌株能降低黄瓜的发病率达35％，处理A（只施用放线菌）比处理B（空白对照）的植株鲜重多4.2g，差异达到显著水平，说明拮抗菌株S-42具有一定的促生作用(P＜0.05)。处理C（同时接种时线菌菌剂和黄瓜枯萎病菌剂）的植株鲜重比处理D（只接种黄瓜枯萎病菌剂）大16g，差异极显著(P＜0.01)，说明拮抗菌株S-42能通过抑制病原菌而间接的促进黄瓜生长。
　　 (5)通过形态特征、培养特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析，构建系统发育树发现该菌与红色薰衣草链霉菌（Streptomycesrubrolavendulea）亲缘关系最近，菌株S-42鉴定为红色薰衣草链霉菌（Streptomycesrubrolavendulea）。

目录

文摘

英文文摘

1 文献综述

1.1 内生微生物

1.1.1 内生菌的概念

1.1.2 植物内生菌的普遍性和多样性

1.1.3 植物内生菌的分类

1.2 植物内生放线菌的研究概况

1.2.1 植物内生放线菌的定义

1.2.2 植物内生放线菌与宿主之间的关系

1.2.3 已研究的植物种类和获得的放线菌类群

1.2.4 内生放线菌的分类现状

1.3 内生放线菌的生物学作用

1.3.1 竞争(competition)作用

1.3.2 拮抗(antobiosis)作用

1.3.3 诱导植物产生系统性抗性(ISR)

1.3.4 对植物的促生作用

1.3.5 固氮作用

1.3.6 内生放线菌在植物病害生物防治中的应用

1.4 黄瓜枯萎病

1.4.1 黄瓜枯萎病病原菌

1.4.2 黄瓜枯萎病循环及发生规律性

1.4.3 黄瓜枯萎病的防治现状

1.5 本试验研究的目的、意义

2 材料与方法

2.1 供试材料

2.1.1 供试菌株

2.1.2 培养基

2.1.3 实验试剂及主要仪器

2.2 拮抗内生放线菌株的筛选

2.2.1 拮抗内生放线菌株的初筛

2.2.2 拮抗内生放线菌株的复筛

2.3 拮抗内生放线菌株S-42的抗菌谱测定

2.4 拮抗放线菌株S-42发酵条件初探

2.4.1 碳源对菌株S-42抑菌活性的影响

2.4.2 氮源对菌株S-42抑菌活性的影响

2.4.3 金属离子对菌株S-42抑菌活性的影响

2.4.4 发酵时间对菌株S-42抑菌活性的影响

2.4.5 PH对菌株S-42抑菌活性的影响

2.5 拮抗内生放线菌株的盆栽试验

2.6 菌株S-42的鉴定

2.6.1 内生放线菌株S-42的形态学观察

2.6.2 拮抗菌株S-42的培养特征观察和生理生化特征分析

2.6.3 菌株S-42的分子鉴定

3 结果与分析

3.1 拮抗内生放线菌株的筛选

3.1.1 拮抗内生放线菌株的初筛

3.1.2 拮抗内生放线菌株的复筛

3.2 拮抗内生放线菌株S-42的抗茵谱测定

3.3 拮抗放线菌株S-42发酵条件初探

3.3.1 碳源对菌株S-42抑菌活性的影响

3.3.2 氮源对菌株S-42抑菌活性的影响

3.3.3 金属离子对菌株S-42抑菌活性的影响

3.3.4 发酵时间对菌株S-42抑菌活性的影响

3.4 拮抗内生放线菌株的盆栽试验

3.5 菌株S-42的鉴定

3.5.1 内生放线菌株S-42的形态学观察 　

3.5.2 放线菌株S-42的培养特征观察和生理生化特征分析

3.5.3 菌株S-42的分子鉴定

4 结论讨论

参考文献

致谢

附录